求助：关于流式抗体选择

五月玫瑰

主要对外周血循环成纤维细胞表型进行鉴定，实验动物是大鼠。检测指标是CD34，CD45，collagen I，因为刚开始接触流式，所以很多地方不懂，请大家帮忙看看我选的抗体还有相关的试剂有什么错误吗，谢谢了！
实验室流式是BD C6,双激光四通道

1.        CD45  BD公司
561588 http://www.bdbiosciences.com/ptProduct.jsp?prodId=1278792&key=561588¶m=search&mterms=true&from=dTable
561586
http://www.bdbiosciences.com/ptProduct.jsp?prodId=1278799&key=561586¶m=search&mterms=true&from=dTable
561867
http://www.bdbiosciences.com/ptProduct.jsp?prodId=1281410&key=561867¶m=search&mterms=true&from=dTable
554847
http://www.bdbiosciences.com/ptProduct.jsp?prodId=23716&key=CD45~FORMAT:FITC~TARGET_SPECIES:Rat¶m=search&mterms=true&from=dTable
后两种是试剂公司推荐的，应该只是剂量不同。前两种是我自己查到的，我也不清楚为什么试剂公司没有推荐，只是染料不同吧，但是我看了C6应该是可以检测。同型对照实验室有，所以不用买了。

2.        CD34  ABCAM
ab187284

http://www.bdbiosciences.com/ptProduct.jsp?prodId=23716&key=CD45~FORMAT:FITC~TARGET_SPECIES:Rat¶m=search&mterms=true&from=dTable


同型对照
ab18280
http://www.abcam.com/mouse-igg1-hybigg1-phycoerythrin-ab1280.html

ab91357
http://www.abcam.com/mouse-igg1-icig1-phycoerythrin-isotype-control-ab91357.html

除了Clone number不同，没有发现其他区别的地方。是不是这两个哪个都可以选啊。

3.collagen I     Rockland
没有找到直接标记的，只能用间接标记
一抗 生物素标记600-406-103
http://www.rockland-inc.com/Product.aspx?id=35156

二抗
611-108-122

http://www.rockland-inc.com/store/Phycoerythrin-Conjugated-Antibodies-611-108-122-O4L_12402.aspx

同型对照
在这个公司买有找到，而且我看有人说间接标记最好一抗是单克隆抗体，但是我真的没找到单克隆抗体的，只找到这个，是多克隆抗体，不知道可以用吗。还有就是同型对照我可以找别的公司的吗？



我的方案 CD45 （FITC）
         CD34和col 1冲突了，都是PE标记的，我再找找看cd34有APC标记的没。


大概就是这些，请懂流式的老师们帮帮看看可行不啊，十分感谢啊！

niwanmao

1、如果冲突，就把其中一个改为其它标记，就象你说的，你先找找CD34 APC也可以。
2、由于你这个方案是三色方案，所以也可以不用同型，而是用FMO对照，站内搜索FMO查看相关概念。
3、克隆号不同，是因为不同的细胞株出来的单抗，你可以详细查看说明书看它针对的位点是否你需要的，如果你不清楚，可以看相关的文献采用什么克隆号。

五月玫瑰

niwanmao 发表于 2015-2-1 11:13
1、如果冲突，就把其中一个改为其它标记，就象你说的，你先找找CD34 APC也可以。
2、由于你这个方案是三色 ...

老师你好，那是不是意味着不用买同型对照了呢。如果这样的话那非特性性结合那部分怎么算呢。您看看是不是这样做呢？非常感谢 啊！
1.不加抗体管
2.CD34+CD45
3.CD34+col 1
4.CD45+COL1
5.CD34+CD45+COL1

niwanmao

五月玫瑰 发表于 2015-2-5 09:40
老师你好，那是不是意味着不用买同型对照了呢。如果这样的话那非特性性结合那部分怎么算呢。您看看是不是 ...

如果你三个抗原的表达率都要看，那么可以这么设，但是如果只看col1的，就只要设一管FMO即可。

五月玫瑰

niwanmao 发表于 2015-2-5 13:04
如果你三个抗原的表达率都要看，那么可以这么设，但是如果只看col1的，就只要设一管FMO即可。 ...

非常感谢，我是三个都要看的～～

五月玫瑰

五月玫瑰 发表于 2015-2-5 20:50
非常感谢，我是三个都要看的～～

老师，麻烦您帮忙看看我的染料搭配有什么问题吗？
1 a-SMA  FITC   
2  CD34    PE
3  COL 1  一抗 Biotin Conjugated  二抗 Streptavidin Cy5.5 Conjugated
4 CD45 APC-cy7

niwanmao

五月玫瑰 发表于 2015-2-6 17:03
老师，麻烦您帮忙看看我的染料搭配有什么问题吗？
1 a-SMA  FITC   
2  CD34    PE

你得看看你的C6滤光片配置是如何的，如果640nm是两个检测通道，倒是可以。如果640nm只有一个，那就不行。