磁珠分选时的洗涤问题

dcl60066 · 发表于 2015-2-5 11:14:22

请问在将经磁珠和细胞孵育后的悬液加入MS柱中后，洗涤未被标记的细胞时，大家是怎么洗涤的呢？是让液体在重力作用下自然流出还是用活塞慢慢推动使其流出呢？这两个方法我都遇到了问题，如果使液体自然流下，则速度太慢，几乎不流动。而如果是用活塞推动流出，我检测了流出液，发现有约30-40%的目的细胞在流出液中，损失太大。请问怎么解决呢？非常感谢

niwanmao · 发表于 2015-2-5 11:14:23

你应该用的是阳性分选，那么这种方式还是建议不要加压，而是靠重力慢慢来，有些事情急不来的。
最后把阳性细胞洗出来是可以用活塞的。

dcl60066 · 发表于 2015-2-6 11:05:19

niwanmao 发表于 2015-2-5 13:33
你应该用的是阳性分选，那么这种方式还是建议不要加压，而是靠重力慢慢来，有些事情急不来的。
最后把阳性 ...

但是自然流下的速度实在是太慢，加入1ml大概要半个小时才能流完。不知大家是否也是这样

niwanmao · 发表于 2015-2-6 11:12:22

dcl60066 发表于 2015-2-6 11:05
但是自然流下的速度实在是太慢，加入1ml大概要半个小时才能流完。不知大家是否也是这样 ...

这个速度应该很正常啊，如果你想速度快，完全可以改用流式分选，不过整体时间下来，估计也差不多。

dcl60066 · 发表于 2015-2-6 12:05:32

niwanmao 发表于 2015-2-6 11:12
这个速度应该很正常啊，如果你想速度快，完全可以改用流式分选，不过整体时间下来，估计也差不多。 ...

额，好吧。主要是我磁珠做得很少，之前不了解这个过程，还以为是什么地方出了问题。非常感谢

烟雨任平生 · 发表于 2017-5-2 22:53:10

注意是不是有气泡，ms柱过柱很快的，正常的缓冲液大概一分钟左右就可以了，加了样本一般在两分钟左右，注意细胞不要太多

你说啥就是啥 · 发表于 2018-1-31 15:46:23

应该还有一个问题是，细胞要打散，有团块的话会堵住子的，速度会很慢很慢

bullfoo · 发表于 2018-7-10 11:28:52

1ml半小时太慢了，上柱子前建议样本充分混匀或者过流式分选的滤网。一般1ml最多也就5分钟

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[磁珠分选] 磁珠分选时的洗涤问题

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