临床9色和10色流式细胞术（二）：多少种颜色才够？

niwanmao

流式中文网编译自Brent Wood. 9-Color and 10-Color Flow Cytometry in the Clinical Laboratory.Arch Pathol Lab Med—Vol 130, May 2006

随着可检测荧光素数量的增加，一个关于多少种荧光素才适合临床实验室检测的问题就提出来了。正如人们所预料的那样，答案就是与检测目的有关。对于一些单一群体的检测或者只需要解决非常简单的问题，可能单色流式细胞术就能解决。如果标本包含复杂的细胞群体，需要检测多个抗原的共表达或进一步分析少量异常细胞群的免疫表型，就需要增加荧光素数量。
原则上，一管细胞解决一个问题是最理想的，但是由于我们研究问题的复杂性，有时候是不可能的。在临床上，很多常见的流式分析（例如淋巴细胞亚群分析、免疫缺陷性疾病评估、阵发性睡眠性溶血性贫血诊断等），要研究的问题很简单，就是：某个特定表型的细胞群比例究竟有多少？因此，1~4色足够了。然而，在白血病、淋巴瘤诊断和监测中，通常需要研究一系列问题，例如：异常细胞群是否存在？异常细胞群可能是哪个系列的？有哪些异常？有时候还需要根据细胞表型分化模式的特点来确定，因此，理论上需要许多颜色。所以，白血病和淋巴瘤的分析是多色流式应用的最好的场景。但是我们也得认识到，即使有了10色流式，也不可能把所有抗体都放在一管中检测，所以，需要进行步骤分解，以便制定可能的方案：

（1）疾病特异性筛查
用一管试剂可特异性区分1种或多种相关的疾病，例如一个样本怀疑慢性淋巴细胞白血病，那么就最好用CD19、CD20、CD5、κ、λ、CD23、CD38、ZAP-70，甚至可能加上CD79b、CD45、FMC7，这样这个方案就至少8色，最多可能10色或更多。虽然这个方案对于肿瘤细胞的鉴别、区分、预后评估的敏感性已经很高了，但是在区分其它B细胞肿瘤（如前B细胞白血病/淋巴瘤或毛细胞白血病）方面却不够，所以还需要加上一些标记。由于造血系统肿瘤种类众多，所以就需要设计疾病特异性组合，有助于在疾病未知时进行筛查。
至于在治疗期间的残留病灶监测时，多色的优势则非常明显，并且更有助于试剂的利用效率。

（2）单管筛查
最理想的方法当然是设置一管抗体就能筛查造血细胞种类，然后再进行下一步的细分。但由于造血系统肿瘤的系列来源和免疫表型种类繁多，所以如果一管内的颜色数量少，那就很难做到单管就可完成。此外，如果单管颜色少，那么鉴定一类异常细胞可能需要多管抗体，从而大大降低效率。

（3）系列特异性筛查
通过疾病特异性筛查（高灵敏度检测到异常细胞）和单管筛查（同时筛选各类造血细胞肿瘤），找到异常细胞及其所属的系列之后，接下来就需要按照其系列来源进一步分析免疫表型和预后指标，在这些系列细分的管中，颜色可以适当减少。例如要评估B细胞肿瘤，可以检测CD45、CD19、CD20、CD10、CD5、CD38、CD34和κ、λ轻链，共9色基本上能解决。总之，鉴别异常B细胞、T/NK细胞、浆细胞、原始细胞、分化异常粒单核造血细胞，都能用10色或9色组合实现。这些详细的组合后面的连载中会讨论到，敬请期待。

而如果单管用8色以下的组合，那么就需要较多管数检测，每管着重一个亚群特征，会使分析特征碎片化，所以3色和4色，甚至5色和6色，对于目前的白血病、淋巴瘤免疫分型的帮助已经很小了，是时候向9色和10色发展了。

坚强顶住

国内的十色，我也不知道哪里开起来了，但是八色的残留确实是金标准

niwanmao

坚强顶住 发表于 2015-2-11 22:36
国内的十色，我也不知道哪里开起来了，但是八色的残留确实是金标准

我下个月开始做。

坚强顶住

niwanmao 发表于 2015-2-12 10:08
我下个月开始做。

倪老师，敢为人先！