流式通道选择

十二郎

各位好，实验室准备购置一台两激光六通道的流式。已选通道为488激发的FITC通道、PE通道、percpcy5.5通道，和638激发的APC通道。还可以再添加两个通道，附上仪器的通道选择，各位有什么建议，请大神推荐{:soso_e113:}。有人推荐488激发的610/20通道，是专门检测PI的，可是感觉这个通道和PE通道的发射波长重叠太多，会不会以后不好调补偿？？？谢谢啦

Arcrain

488nm激光上配610/20的确不太合理（488nm激光不能用来测量RFP）。PI用585/42通道测量结果就非常好了，我见过的，完全可以放心。
如果没有配405nm的激光器，就像倪老师指点的，加APC-Cy7通道，另一个加在488nm激光上，选PE-CY7。
一般来说APC-CY7和PE-CY7可以同时用，荧光补偿不大，都是亮度很高的染料。Alexa700亮度低，我觉得不如PE-CY7好。
配了405激光，加450/45通道，无论做多色测量，还是用来区分细胞死活，会非常好用。

niwanmao

你准备做哪些流式实验？

十二郎

niwanmao 发表于 2015-4-30 13:58
你准备做哪些流式实验？

倪老师好，我做B细胞的亚群检测，目前用的是ebioscience的抗体，荧光素为FITC、PE、percpcy5.5和APC。另外实验室以小鼠和细胞为实验材料，其他常见的周期、凋亡、倍体、增殖以及血小板活化等常见实验。倪老师看一下加什么通道好一些呢？？
另外问倪老师一个问题，在每一次处理样品的过程中，感觉实验操作几乎没有什么变动，可是实验上机检测的时候，重复性并不是很好，这是为什么呢？？实验对象为骨髓中的B细胞，标记为B220-percpcy5.5，CD43-fitc，IgM-PE。希望倪老师指点迷津，谢谢。

niwanmao

十二郎 发表于 2015-4-30 15:23
倪老师好，我做B细胞的亚群检测，目前用的是ebioscience的抗体，荧光素为FITC、PE、percpcy5.5和APC。另 ...

那就加780/60（APC-Cy7）和450/45BP（Pacific blue）两个通道。

你说的重复性这属于批间差异，一般变化较大的是出现在连续表达的抗原上，尤其象IgM的检测容易受血浆中的游离IgM干扰，更加变异大。建议每次均采用同型 设门。

十二郎

Arcrain 发表于 2015-4-30 17:51
488nm激光上配610/20的确不太合理（488nm激光不能用来测量RFP）。PI用585/42通道测量结果就非常好了，我见 ...

没有405的激光   谢谢指教

十二郎

Arcrain 发表于 2015-4-30 17:51
488nm激光上配610/20的确不太合理（488nm激光不能用来测量RFP）。PI用585/42通道测量结果就非常好了，我见 ...

多谢指点   和我的理解不谋而合   哈哈

磊子-梦醒十分

Arcrain 发表于 2015-4-30 12:01
488nm激光上配610/20的确不太合理（488nm激光不能用来测量RFP）。PI用585/42通道测量结果就非常好了，我见 ...

检测RFP需要配备635nm的激光器吗？@niwanmao

niwanmao

磊子-梦醒十分 发表于 2016-4-14 10:26
检测RFP需要配备635nm的激光器吗？@niwanmao

我查了下，RFP应该是555nm激发最好吧。
不过在查的时候，发现BD的C6仪器配置上，FL3居然写着RFP也能测，奇怪了。

磊子-梦醒十分

niwanmao 发表于 2016-4-14 18:39
我查了下，RFP应该是555nm激发最好吧。
不过在查的时候，发现BD的C6仪器配置上，FL3居然写着RFP也能测， ...

谢谢倪老师