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[标本处理] 流式检测ros 光补偿 细胞发绿色荧光

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发表于 2015-5-4 13:49:42 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏2流星已解决
第一次做流式,我买了life的CellROX® Flow Cytometry Assay Kits检测ros的试剂,因为我的细胞本身发绿色荧光,我不清楚什么情况下需要光补偿。这是里面试剂参数CellROX® Deep Red Ex/Em maxima(in nm)640/665 ;CellROX® Orange Ex/Em maxima(in nm) 545/565。这个需要荧光补偿吗?谢谢

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楼主选用的是盒子有红色(640/658)+橙色(545/565),再加上细胞带有绿色(488/520?),相当于FITC、PE、APC三色的!要做补偿对照,这三个通道其实有个带绿色荧光的细胞调补偿就差不多了! 其它就是实验的阴阳性对照了!
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发表于 2015-5-4 13:49:43 | 显示全部楼层
杨敏 发表于 2015-5-4 21:09
谢谢老师,我用的是这个CellROX® Green and CellROX® Orange Flow Cytometry Assay Kits试剂盒,链接是 ...

楼主选用的是盒子有红色(640/658)+橙色(545/565),再加上细胞带有绿色(488/520?),相当于FITC、PE、APC三色的!要做补偿对照,这三个通道其实有个带绿色荧光的细胞调补偿就差不多了!
其它就是实验的阴阳性对照了!
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 楼主| 发表于 2015-5-4 19:28:12 | 显示全部楼层
看发射波长
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发表于 2015-5-4 20:03:28 | 显示全部楼层
从Life网站的产品参数看,CellROX® Deep Red和CellROX® Orange应该是两个kit吧。
对于发绿色荧光的细胞,建议还是用前者更好,至于补偿,从激发和发射波长看,deep red kit是不用调节补偿的。
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 楼主| 发表于 2015-5-4 21:09:12 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2015-5-4 20:03
从Life网站的产品参数看,CellROX® Deep Red和CellROX® Orange应该是两个kit吧。
对于发绿色荧光的细胞, ...

谢谢老师,我用的是这个CellROX® Green and CellROX® Orange Flow Cytometry Assay Kits试剂盒,链接是http://www.lifetechnologies.com/ ... ICID=search-product。里面加完CellROX® Detection Reagent 45min后加入SYTOX® Dead Cell Stain solution,然后进行流式上机检测。请问老师我该怎么设置实验对照?
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发表于 2015-5-5 11:42:07 | 显示全部楼层
杨敏 发表于 2015-5-4 21:09
谢谢老师,我用的是这个CellROX® Green and CellROX® Orange Flow Cytometry Assay Kits试剂盒,链接是 ...

用未处理的细胞作为阴性对照,再设置一个肯定可以引起ROS变化的药物诱导作为阳性对照。
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