eBioscience的 treg 试剂盒使用时如何调补偿

田田

如题，想测小鼠外周血和脾脏的treg，买的是eBioscience的试剂盒。
里面有这么几支抗体：
Anti-Mouse CD4 FITC (RM4-5): 50 µg. Use at 0.125 µg/tes
Anti-Mouse CD25 APC (PC61.5): 50 µg. Use at 0.06 µg/tes
Anti-Mouse/Rat Foxp3 PE (FJK-16s): 25 µg. Use at 0.5 µg/test
Rat IgG2a Isotype Control PE: 50 µg. Use at 0.5 µg/test
Anti-Mouse CD16/32 (Fc Block) Purified: 50 µg. Use at 1-5 µg/test


从来没测过treg。请问如何调补偿？需要CD4、CD25和Foxp3单染的管子吗？需要同型对照吗？
谢谢各位老师和同学~

Arcrain

这种荧光组合在配备488nm（FITC）,561nm(PE),640nm(APC)三杆激光的流式仪上基本不需要调补偿，注意下FITC减掉一点点PE信号就可以了。
调补偿要准备每种荧光抗体的单阳性对照（单染，且同时有阳性群和阴性群）来进行。

CD25一般表达不高，还有可能存在非常弱阳性表达的T细胞群.需要同型对照。

niwanmao

可以只做CD4单标，调节PE-FITC补偿。
至于FITC-PE的补偿值一般很小，并且foxP3荧光不会很强，不调节补偿没关系。
CD25和其它两个标记之间不存在补偿。

同型对照需要，但是结合FMO对照，就是说设置CD4、CD25、Rat IgG2a Isotype Control这么一管作为foxP3设门对照。

具体分析方法参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2114-1-1.html

田田

niwanmao 发表于 2015-5-6 13:18
可以只做CD4单标，调节PE-FITC补偿。
至于FITC-PE的补偿值一般很小，并且foxP3荧光不会很强，不调节补偿没 ...

谢谢倪老师

暖希贤

niwanmao 发表于 2015-5-6 13:18
可以只做CD4单标，调节PE-FITC补偿。
至于FITC-PE的补偿值一般很小，并且foxP3荧光不会很强，不调节补偿没 ...

请问老师针对Treg，调电压的细胞、还有单标组，是否都需要做到破核膜而不标FOXP3那一步？这样是不是做出来图就不用再进一步调了。谢谢老师

niwanmao

暖希贤 发表于 2016-1-25 20:43
请问老师针对Treg，调电压的细胞、还有单标组，是否都需要做到破核膜而不标FOXP3那一步？这样是不是做出 ...

Treg其实还是简单的，分群都还是比较清楚的，真要做对照，确实要做到除了标记的抗体不同，破核膜等处理因素要一致。