叠氮钠的作用

爱白衣杀手

FACS buffer 中叠氮钠是什么作用？不加行吗？

小憨

稍微百度了一下，供参考。


关于蛋白保护剂：

蛋白在高浓度时更不容易降解（1 mg/ml 或者更高），这就是为什么在抗体中加入BSA 之类作为稳定剂的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。但是如果抗体要用来标记的话，则不能加入蛋白稳定剂，因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。


关于叠氮化钠（sodium azide）的使用：

为了防止微生物污染，叠氮化钠经常被加入到抗体中（终浓度0.02% (w/v)）。Abcam 的很多抗

体已经含有了0.02%-0.05%的叠氮化钠，在说明书的“Storage buffer”中有标明的。


在下述情况中不能使用叠氮化钠：

（1） 如果抗体用于染色或处理活细胞，用于体内研究：

叠氮化钠在抵抗微生物的同时，对其它大部分有机物也是有毒的，因为它阻断了线粒体的

cytochrome electron transport system.

（2） 要偶联带有氨基基团的抗体：

叠氮化钠会干扰任何含有氨基基团的偶联，因此在进行偶联之前，应将叠氮化钠去除。偶联后的抗体可以加入叠氮化钠保存，但是浓度只能是0.01%。对于需要偶联的抗体，thimerosal(merthiolate)可以替代叠氮化钠作为保护剂！


注：叠氮化钠的去除方式：

可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除！IgG 的分子量是150 kDa (IgM 是~ 600 kDa)；叠氮化钠的分子量只有65 Da。使用cut off 14 kDa 的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除。

编

爱白衣杀手

我觉得这个解释不错。BSA and FBS (or any other serum for that matter) will accomplish pretty much the same thing when staining cells for flow cytometry. there is no need to use sodium azide in these buffers, it will only for the prevent microbial growth. People use 'protein containing buffers' for flow cytometry is to prevent cells from sticking to the side of plastic tubes (or other culture labware) as well as preventing cell clumping.

niwanmao

爱白衣杀手 发表于 2015-7-1 19:38
我觉得这个解释不错。BSA and FBS (or any other serum for that matter) will accomplish pretty much the ...

buffer中没有必要用。

爱白衣杀手

niwanmao 发表于 2015-7-1 20:12
buffer中没有必要用。

buffer但是我看到的FACSbuffer配方都有这个叠氮钠，确实如果不加的话，buffer容易长菌污染，因为里边有血清。

niwanmao

爱白衣杀手 发表于 2015-7-5 08:56
buffer但是我看到的FACSbuffer配方都有这个叠氮钠，确实如果不加的话，buffer容易长菌污染，因为里边有血 ...

临床上的标本中本身就有血清，所以一般都用PBS重悬。
可能科研中会用到含BSA或FBS的buffer吧，这个我倒是没有考虑到。

小憨

爱白衣杀手 发表于 2015-7-5 08:56
buffer但是我看到的FACSbuffer配方都有这个叠氮钠，确实如果不加的话，buffer容易长菌污染，因为里边有血 ...

因为叠氮钠有剧毒且易爆，属于危险品中的战斗机，所以建议还是不要加了。怕长菌就过滤除菌然后分装50 mL一管放着，用一管打开一管。我们实验室是直接冻-20。

爱白衣杀手

小憨 发表于 2015-7-6 09:05
因为叠氮钠有剧毒且易爆，属于危险品中的战斗机，所以建议还是不要加了。怕长菌就过滤除菌然后分装50 mL ...

长见识也就是PBS+血清作为流式缓冲液？

小憨

爱白衣杀手 发表于 2015-7-6 18:07
长见识也就是PBS+血清作为流式缓冲液？

不知道你买过那种商业化的叫staining buffer的东东没有，其实就是5% FBS（还是1%的我记不清了）的PBS加了0.5%的叠氮钠，有的可能再加点儿EDTA，说是用作流式的封闭用和洗涤用。FBS可以用BSA代替，但是FBS对细胞在操作过程中能够存活可能更好，先固定后染色的细胞就无所谓了。

爱白衣杀手

小憨 发表于 2015-7-6 09:05
因为叠氮钠有剧毒且易爆，属于危险品中的战斗机，所以建议还是不要加了。怕长菌就过滤除菌然后分装50 mL ...

恩，晓得了，我一直加的叠氮钠，血清，其实很安全，没那么恐怖。