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[结构和原理] PI的通道问题

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发表于 2015-7-14 09:54:07 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏2流星已解决
各位好,请教一个问题,ECD通道发射光为610/20,PE通道为585/42,PC5.5通道为690/50,PI发射光为617。因PI的发射光谱过宽,当用PE和PC5.5双色标记某一细胞群时,是不是就不能用ECD通道检测PI 呢???请各位指教,谢谢{:soso__3409329614010722382_4:}

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如果要用PI测细胞周期,再加另外两个荧光,我的看法是: 488nm激发的PI和FITC可以区分开,我原来在FACSCalibur上就碰到过(PI+GFP,PI+BrdU,乙醇固定),注意调节一下补偿,可以得到良好的结果。再加其它荧光的话,638nm激发的APC和APC-Cy7可以用,488nm激发的PE-Cy7也可以用,这样,FITC,PE-Cy7,APC,APC-Cy7都可以同时用了,当然要看仪器配置。 用乙醇固定细胞标记PI,乙醇固定可能会破坏某些抗原表位,影响染色。一般认为甲 ...
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发表于 2015-7-14 09:54:08 | 显示全部楼层
如果要用PI测细胞周期,再加另外两个荧光,我的看法是:
488nm激发的PI和FITC可以区分开,我原来在FACSCalibur上就碰到过(PI+GFP,PI+BrdU,乙醇固定),注意调节一下补偿,可以得到良好的结果。再加其它荧光的话,638nm激发的APC和APC-Cy7可以用,488nm激发的PE-Cy7也可以用,这样,FITC,PE-Cy7,APC,APC-Cy7都可以同时用了,当然要看仪器配置。
用乙醇固定细胞标记PI,乙醇固定可能会破坏某些抗原表位,影响染色。一般认为甲醛固定不会破坏抗原,可以用去垢剂透膜穿孔的办法来让细胞标记上PI。
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发表于 2015-7-14 16:49:08 | 显示全部楼层
本帖最后由 Arcrain 于 2015-7-14 16:50 编辑

PI,PE,PE-Cy5.5,这三个染料中PI对其它两个的发射光谱重叠太大!都可以用488nm和561nm激光激发。建议不要加上PI。
d:\1.bmp


区分死活可以用405nm激发的DAPI(死细胞高亮)、sytoxblue等染料来进行,不影响其它通道。

PE,PI,PC5.5

PE,PI,PC5.5

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 楼主| 发表于 2015-7-15 09:04:24 | 显示全部楼层
Arcrain 发表于 2015-7-14 16:49
PI,PE,PE-Cy5.5,这三个染料中PI对其它两个的发射光谱重叠太大!都可以用488nm和561nm激光激发。建议不要 ...

  没有405的激光   sytoxblue和DAPI都是405激发。区分死活细胞的话eb公司也有一种染料,可以用APC通道。我是想只有488和638的时候,做多色或者说双色标记细胞的细胞周期就不能用PI了,那应该怎么办呢??
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发表于 2015-7-15 09:41:35 | 显示全部楼层
十二郎 发表于 2015-7-15 09:04
没有405的激光   sytoxblue和DAPI都是405激发。区分死活细胞的话eb公司也有一种染料,可以用APC通 ...

Life的live/dead kit有FL1通道的。
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 楼主| 发表于 2015-7-15 11:11:50 | 显示全部楼层
Arcrain 发表于 2015-7-15 10:08
如果要用PI测细胞周期,再加另外两个荧光,我的看法是:
488nm激发的PI和FITC可以区分开,我原来在FACSCali ...

解答太赞了,必须5分好评。另外问一下做细胞周期的话,除了用PI还有其他染料吗?你说的固定用的甲醛是指1%的多聚甲醛吗??
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发表于 2015-7-31 10:54:21 | 显示全部楼层
活细胞周期检测有Hoechst33342,需要355nm激光器,而且想要得到较好的周期峰,可能需要摸索一下实验条件,小心操作。
DAPI可染死活细胞,测量周期时是染死细胞。

到Life网站上看看,收购Invitrogen-Molecule Probe后他们推出了一系列检测死、活细胞的DNA含量的试剂盒,有不同颜色。

用4%中性甲醛(PBS中,PH7.2-7.4)固定细胞,可以很好的保持组织细胞的抗原活性。4%多聚甲醛主要用于培养细胞的固定。

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