流式CD4不分群

王小常

各位前辈，最近在做流式检测，用的是BD的试剂盒，CD4-FITC,IL-10-PE做出来结果CD4分群不明显，分析数据时遇到些疑惑。向各位前辈请教一下，先放几张图，请问CD4不分群是怎么回事？（1.抗体是BD的，应该没问题。2.是先标CD4，再固定破膜，标IL-10。）

niwanmao

是否培养并刺激过？原因多方面：
1、刺激的影响。
2、CD4抗体用量的问题。
3、细胞的问题。

goldfish456

用的是什么细胞？阴性对照有没有做？

王小常

niwanmao 发表于 2015-7-29 15:18
是否培养并刺激过？原因多方面：
1、刺激的影响。
2、CD4抗体用量的问题。

是分离的PBMC，加PHA后共培养72小时后，观察到有明显的集落。
你说的刺激的影响是指刺激过度会标不上吗？
抗体用量我们实验室一般是按照试剂要求的减半，师兄师姐都标的挺好
细胞问题是指细胞死了会标不上吗？但我的IL-10好像标上了呀

王小常

goldfish456 发表于 2015-7-29 16:01
用的是什么细胞？阴性对照有没有做？

养的PBMC,刚开始做，所以没做阴性对照。

niwanmao

王小常 发表于 2015-7-29 16:30
是分离的PBMC，加PHA后共培养72小时后，观察到有明显的集落。
你说的刺激的影响是指刺激过度会标不上吗？ ...

PHA刺激可能会影响CD4。你要么换成CD3和CD8标记试试。

freshrain

刺激后CD4表达会降低，是造成分群不好的原因。建议采用倪老师说的CD3和CD8。

Arcrain

这个图是否与在仪器上测量时实时显示的结果一致？
也有可能坐标轴标识的参数被软件互混了，将X轴改成其它名称的参数试试。

stars

@freshrain 您提及刺激后CD4表达降低，导致分群不好，可有可靠的依据？我在做实验的过程中发现刺激6小时后分群分的不开（依旧看出是两群），但是比例是增加了的？刺激18小时后就无法看出分群了？请问您可否指点一下。另@niwanmao 倪老师请您也指点一下吧

niwanmao

stars 发表于 2019-10-31 09:25
@freshrain 您提及刺激后CD4表达降低，导致分群不好，可有可靠的依据？我在做实验的过程中发现刺激6小时后 ...

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