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[流式相关软件] 请教老师看看我做的流式图有哪些地方需要改进

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发表于 2015-10-8 19:12:33 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏10流星已解决
首先我用红细胞裂解液裂解全血,做的流式(机器是BD的canto II),阴性对照的图如下
问题有以下几个方便
1 FSC/SSC这张图,整体细胞往上飘,我电压用的是SSC:500;FSC:520;阈值用的16000,电压我也上下调整了,但好像用处不是很大。想问这种现象是可以调节好的还是跟本身细胞有关系?
2 图5,6都有一些细胞落在阳性区域,这是非特异结合?可以通过调节什么参数去除吗?还有图6好像不是很聚集在左下角,这是什么原因?
3 因为才刚开始接触,想了解下这几张图的质量水平处于什么位置?还有哪些可以改进的地方。

1_meitu_1.jpg
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最佳答案

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第一张FSC/SSC散点图碎片估计占90%以上吧,FSC的阈值需要继续加大,把这些碎片去掉。SSC的电压可以适当降低一点。 图5、6的那些少量信号是假阳性,可以认为是非特异性结合,排除掉死细胞和碎片,就干净了。 图6这个形状也是对的,不一定全部都是纯圆形。 把死细胞排除掉,就可以使结果达到高质量。 ...
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发表于 2015-10-8 19:12:34 | 显示全部楼层
第一张FSC/SSC散点图碎片估计占90%以上吧,FSC的阈值需要继续加大,把这些碎片去掉。SSC的电压可以适当降低一点。

图5、6的那些少量信号是假阳性,可以认为是非特异性结合,排除掉死细胞和碎片,就干净了。
图6这个形状也是对的,不一定全部都是纯圆形。

把死细胞排除掉,就可以使结果达到高质量。
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 楼主| 发表于 2015-10-8 19:19:50 | 显示全部楼层
同时用同样的样本提取PBMC做的,好像就没有怎么成群分布,正常的PBMC应该也能看到淋巴细胞和单核细胞的。
图1 是PBMC的FSC/SSC的图,想问一下这种原因是什么?是PBMC提取质量不够好还是参数没有调节好?
图2 是CD3单染的情况,想问下这种火箭状需要调节什么参数?还是细胞的问题?
图3 是PBMC提取后培养CIK细胞,第九天后上的流式图,碎片比较多,圈出来的应该是淋巴细胞吧?希望得到解答!
7_meitu_7.jpg
8_meitu_8.jpg
9_meitu_9.jpg
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 楼主| 发表于 2015-10-8 21:02:10 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2015-10-8 19:56
第一张FSC/SSC散点图碎片估计占90%以上吧,FSC的阈值需要继续加大,把这些碎片去掉。SSC的电压可以适当降 ...

谢谢老师,我会再调整看看。可否帮忙在看下2楼的图,万分感谢了!
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发表于 2015-10-8 21:34:53 | 显示全部楼层
Jing310 发表于 2015-10-8 21:02
谢谢老师,我会再调整看看。可否帮忙在看下2楼的图,万分感谢了!

2楼也是死细胞太多的问题,用死活鉴别染料排除掉死细胞就好了。
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 楼主| 发表于 2015-10-9 09:00:21 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2015-10-8 21:34
2楼也是死细胞太多的问题,用死活鉴别染料排除掉死细胞就好了。

老师再问一下,我选用CD3-percp,CD8-PE,CD56-PE-Cy7,这几个抗体,想问下这几个荧光选择怎么样?是否需要做补偿?
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发表于 2015-10-9 12:18:44 | 显示全部楼层
Jing310 发表于 2015-10-9 09:00
老师再问一下,我选用CD3-percp,CD8-PE,CD56-PE-Cy7,这几个抗体,想问下这几个荧光选择怎么样?是否需 ...

俩俩之间都需要做补偿。
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