RORγt与IL-17共染问题

wswlijian

RORγt与IL-17共染，只有单阳性群，无双阳性群。Why？

X轴-IL-17，Y轴-RORγt

X轴-IL-17，Y轴-RORγt

bimawenlaile

一：非极化的外周血PBMC中 ROR表达很少  所以双染不明显  二：ROR在核内表达，IL17在胞浆表达，目前商品化的破膜液似乎还没有能够两种同时染得很好的  所以

小憨

你gate在CD4+再看看

小憨

图真的做的好漂亮啊，虽然不是你预期的结果

wswlijian

小憨 发表于 2015-10-23 17:13
你gate在CD4+再看看

这是已经gata CD4+的群

niwanmao

wswlijian 发表于 2015-10-23 17:23
这是已经gata CD4+的群

能确定这个标本肯定有双阳性细胞吗？

wswlijian

niwanmao 发表于 2015-10-23 20:19
能确定这个标本肯定有双阳性细胞吗？

细胞来自病人样本的PBMC，含有Th17细胞，理应能染出RORγt与IL-17的双阳性群，但是我没有染出来，搜索CNS paper，目前也没有找到直接共染RORγt与IL-17的图，都是把RORγt与IL-17分开来看。RORγt作为转录因子之一，为什么不能看double-staining的呢,?很是不解

小憨

bimawenlaile 发表于 2015-10-24 23:05
一：非极化的外周血PBMC中 ROR表达很少  所以双染不明显  二：ROR在核内表达，IL17在胞浆表达，目前商品化 ...

我都用foxp3的破膜液做胞浆细胞因子的染色，没问题的。
我觉得主要是体外跟体内的条件不一样，像你说的，问题在于体外诱导过程。