胞内染色

xiaoyue · 发表于 2015-10-29 17:50:38

{:soso_e163:}请教各位老师：
做胞内染色时因为需要固定和打孔，我做的步骤为先4%多聚甲醛固定，20min，加入500 ul PBS 离心5min，再0.1%皂素打孔 20min，加入500 ul PBS 离心5min，再染色30min，再洗一次即加入500 ul PBS 离心5min，重悬，检测。这样一折腾细胞损失很多。有没有哪一步可以简化，减少细胞的损伤呢？谢谢各位老师指导！

niwanmao · 发表于 2015-10-29 19:59:12

可以试试把皂素打孔和胞内抗体孵育放在一起作用30分钟，减少一次离心步骤。

其实细胞不会损伤太多，只是离心次数多了，有时候去上清不小心可能会导致细胞丢失。

xiaoyue · 发表于 2015-10-29 20:00:21

好的谢谢老师！

xiaoyue · 发表于 2015-10-29 20:03:42

老师，请问皂素打孔时，一般加入多少微升呢，我现在是加入100 ，要是和抗体一起孵育的话，会不会抗体稀释太多了，影响与细胞的有效结合啊？

niwanmao · 发表于 2015-10-30 21:00:57

xiaoyue 发表于 2015-10-29 20:03
老师，请问皂素打孔时，一般加入多少微升呢，我现在是加入100 ，要是和抗体一起孵育的话，会不会抗体稀释太 ...

具体量不会固定，需要根据不同细胞和抗体摸索不同的量。体积不会大的，没事。

xiaoyue · 发表于 2015-10-31 20:55:52

谢谢老师

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