请教关于FOXP3的问题

xiaodayupday

     今天做了CD4+CD25+FOXP3+,人外周血未刺激培养，CD4CD25先染，然后破膜（普通破膜剂），染foxp3，结果foxp3检测不出来。有老师说需要刺激培养，但是说明书没有说要刺激，现请问:1.到底需不要刺激培养。2.破膜剂必须用foxp3专用破膜剂吗?    该破膜剂测IL4可以检测出

niwanmao

1、不刺激培养可以检测出Treg，比例较低，大约占CD4+T细胞的3％左右。
2、破膜剂必须用foxP3破膜剂，因为需要破掉核膜，普通破膜剂只能破细胞膜。

xiaodayupday

受教了，谢谢您

xiaodayupday

倪老师，如果刺激的话不是会造成CD4內吞吗，这怎么解决呢

niwanmao

xiaodayupday 发表于 2015-11-14 21:53
倪老师，如果刺激的话不是会造成CD4內吞吗，这怎么解决呢

多看看站内以前的文章：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4750-1-1.html

mxc0712

最近也在做FoxP3标Tregs，新鲜外周血直接检测，不刺激，现在条件基本固定了，买的不是成套的kit，FoxP3用的推荐量的一般（2.5ul），固破剂用的BD的，按步骤操作能染出来。先前还做了抗体滴定，再有就是细胞要收的足够多，尤其淋巴门内细胞数建议收到两万以上（个人感觉）。

家的感觉

mxc0712 发表于 2015-11-18 11:35
最近也在做FoxP3标Tregs，新鲜外周血直接检测，不刺激，现在条件基本固定了，买的不是成套的kit，FoxP3用的 ...

收集的细胞多一些好，我们有个老师做病人的样本，有时采了不同时间的病人血分离淋巴细胞，冻存一段时间后集中测，他要手机五万到十万个，他说在国外老板让收集五十万，一百万，具体也不清楚

niwanmao

家的感觉 发表于 2015-11-18 14:01
收集的细胞多一些好，我们有个老师做病人的样本，有时采了不同时间的病人血分离淋巴细胞，冻存一段时间后 ...

这跟细胞比例有关，100万细胞总量可以使精度达到0.001％

暖希贤

niwanmao 发表于 2015-11-14 21:38
1、不刺激培养可以检测出Treg，比例较低，大约占CD4+T细胞的3％左右。
2、破膜剂必须用foxP3破膜剂，因为需 ...

请问老师用triton-X100是破不掉核膜的么？我用的美天旎的PE-FOXP3，要是选择破膜剂也必须用他家的么？谢谢

niwanmao

暖希贤 发表于 2015-11-23 11:51
请问老师用triton-X100是破不掉核膜的么？我用的美天旎的PE-FOXP3，要是选择破膜剂也必须用他家的么？谢 ...

Triton-X 100是可以破核膜的，但是自己配制浓度、条件需要摸索，用商业化的破核膜试剂可以选择任意一家的。