CD3激活T细胞增殖能力太低

dreamhere

使用OKT3抗体包被培养板后，加入脐带血单核细胞，并用CFSE标记，经过3天培养后流式检测CFSE，请问老师，T细胞增殖活化能力是不是太低了？活化T细胞必须要加CD28吗？想用PHA活化不知道效果怎么样？
还有，淋巴细胞的位置不知是否正确，门右侧细胞加入CD3活化后明显增多，不知是什么？


对照（0ug/ml）

实验2

实验1

0.5ug/ml

对照2

对照1

小憨

木石织梦 发表于 2015-11-26 11:34
是不是选FSC/SSC图里后的FSC大的那群会好点呢？我觉得你选的这群是凋亡了的。试试看呐~ ...

T细胞活化后在镜下明显看到体积增大，所以FSC应该是大的那群的，此外用包被CD3和28抗体的微球活化比包被的板子更好，现在有商品化的微球。

niwanmao

关于CFSE的protocol站内以前发过好多，可以参考一下。

dreamhere

niwanmao 发表于 2015-11-22 13:15
关于CFSE的protocol站内以前发过好多，可以参考一下。

谢谢倪老师！又看了之前关于CFSE的帖子，确实受益良多。

木石织梦

是不是选FSC/SSC图里后的FSC大的那群会好点呢？我觉得你选的这群是凋亡了的。试试看呐~

木石织梦

小憨 发表于 2015-11-26 12:23
T细胞活化后在镜下明显看到体积增大，所以FSC应该是大的那群的，此外用包被CD3和28抗体的微球活化比包被 ...

完全同意

dreamhere

感谢建议，后来分析也觉得是右侧细胞群是目的细胞，可是如图

为什么没有活化的左侧细胞群CFSE强度比右侧活化的细胞群大呢？

niwanmao

dreamhere 发表于 2015-11-27 20:24
感谢建议，后来分析也觉得是右侧细胞群是目的细胞，可是如图

为什么没有活化的左侧细胞群CFSE强度比右侧活 ...

这种会不会是由于细胞增大，导致非特异性荧光增强？有请@木石织梦 @小憨  回答一下。

小憨

我随便挑了一张我的实验结果，供参考哈~

木石织梦

dreamhere 发表于 2015-11-27 20:24
感谢建议，后来分析也觉得是右侧细胞群是目的细胞，可是如图

为什么没有活化的左侧细胞群CFSE强度比右侧活 ...

呃，我不是很懂你的问题。左侧的细胞凋掉的比右侧活化的细胞群大，细胞数多，CFSE强度自然就更大不是么？而且，您可以看出右侧有活化的那群，CFSE有三条带，第二条带最明显，说明分裂的第二代最多。左侧的细胞群CFSE基本只有一代，后面的带都很模糊，而且比例很低，不也说明基本都是凋亡没有分裂的么……