为什么开启双指数模式后空白对照会分群？

味海医心

最近我发现用我们实验中心的那台FACS AriaII做的标本，开启双指数转换后在阴性区都会分群，我一开始以为是偶联抗体分解，结果发现连单染的补偿微球甚至空白对照也有这种现象，不知道大家有没有遇到过。但我看一个月以前做的样本好像没有这种情况，至少不那么明显

空白对照，以FSC×SSC圈的淋巴细胞

niwanmao

最后一个图是单染，为什么PE-Cy7这么强？我觉得可能还是跟荧光素有关。

味海医心

最后一个是用PerCP-Cy5.5染的补偿微球，所以很强。PE-Cy7是荧光溢漏的。但问题是第一张空白管里也出现了分群我就搞不懂了，而且是这几次才有的，以前做的都没有

niwanmao

味海医心 发表于 2015-12-6 16:48
最后一个是用PerCP-Cy5.5染的补偿微球，所以很强。PE-Cy7是荧光溢漏的。但问题是第一张空白管里也出现了分 ...

你用的是什么仪器？BD的CantoII？考虑用CS&T微球跑一下，看看仪器性能

味海医心

我们实验室用的是FACS Aria II，之前有老师用微球跑过，说是488的蓝激光功率下降，要换。不知道和这个有没有关系，是不是比一个月前情况更差了

niwanmao

味海医心 发表于 2015-12-7 00:15
我们实验室用的是FACS Aria II，之前有老师用微球跑过，说是488的蓝激光功率下降，要换。不知道和这个有没 ...

有可能的，但是从原理上不是很说得通。

你可以试试别用双指数，而是用普通的对数坐标，试着把两个荧光通道的电压加大，让阴性细胞群都跑出来看看是不是依然是两群的，因为有时候双指数或许转换的时候有点不同。

味海医心

双指数好像是不那么明显，但是压线细胞太多。可能还是功率问题吧，我PerCp-Cy5.5已经调到1000了，PE-Cy7也800多

空白

单看CD4+的比例

不压线圈门

压线圈门

niwanmao

味海医心 发表于 2015-12-7 11:03
双指数好像是不那么明显，但是压线细胞太多。可能还是功率问题吧，我PerCp-Cy5.5已经调到1000了，PE-Cy7也8 ...

你这个是用LOG获取的吧？调到1000的话确实不太好。建议换台机器或者更换激光器。

味海医心

嗯，那边老师说报告上去了，但是一时半会儿肯定换不了，只好再找机器了。就想问问看大家有没有遇到过这种状况