为什么4%多聚甲醛固定样本后与抗体有更高的结合率

向前 · 发表于 2015-12-30 09:44:16

附件图片是流式检测直方图结果，除了固定与不固定这唯一一个条件改变之外，其他的条件都是相同的额，请教高人指点，这是为什么呢？

niwanmao · 发表于 2015-12-30 20:18:22

其实最好看散点图。我认为应该是固定后，细胞的自发荧光水平增高导致的。

向前 · 发表于 2015-12-31 08:18:50

niwanmao 发表于 2015-12-30 20:18
其实最好看散点图。我认为应该是固定后，细胞的自发荧光水平增高导致的。 ...

倪老师好，
同型对照也是经过固定的，条件一样的，为什么同型对照依旧是那么低的荧光强度，而目标抗体的荧光强度会有增加呢？

niwanmao · 发表于 2015-12-31 11:10:38

向前发表于 2015-12-31 08:18
倪老师好，
同型对照也是经过固定的，条件一样的，为什么同型对照依旧是那么低的荧光强度，而目标抗体的 ...

你把FSC/SSC散点图和FL1/FL2散点图调出来看看就清楚了。

Firefly · 发表于 2017-12-20 15:25:54

我现在遇到的问题和您一样，怀疑固定后死细胞可能更容易和抗体结合

niwanmao · 发表于 2017-12-20 17:36:43

Firefly 发表于 2017-12-20 15:25
我现在遇到的问题和您一样，怀疑固定后死细胞可能更容易和抗体结合

固定后不是死，而是蛋白构象发生交联，可能会使得结合能力发生改变。

向前 · 发表于 2018-1-3 11:16:22

niwanmao 发表于 2017-12-20 17:36
固定后不是死，而是蛋白构象发生交联，可能会使得结合能力发生改变。

构象改变，这种现象是非特异性结合，还是特异性抗体结合能力增强了呢？

niwanmao · 发表于 2018-1-4 08:15:34

向前发表于 2018-1-3 11:16
构象改变，这种现象是非特异性结合，还是特异性抗体结合能力增强了呢？ ...

还是一种非特异性的。

liuruiluna · 发表于 2018-1-4 16:39:05

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