幼稚细胞培养后出现两群lymphocytes怎么圈Treg门

钢蛋儿

做Treg诱导分化试验：MACS分选幼稚细胞，培养5后 ( 加CD3/CD28/IL-2)，诱导组加用TGF-β。
流式检测：发现散射门出现两群lymphocyte（右上群含CD4 >95% 右下群含CD4 约70%）。

求助到底是怎么回事？以至于流式老师也搞晕了，Treg群也圈的很糟糕。
请老师帮我分析下原始文件
5_01：Blank
5_2：CD4CD25Foxp3三标（诱导孔）
5_4：CD4CD25Foxp3三标（对照孔）
原始文件的附件太大，传到百度云了。。链接：http://pan.baidu.com/s/1kUgZuDL 密码：ag7k

散射门

niwanmao

钢蛋儿 发表于 2016-1-30 00:16
谢谢老师！
1、我们流式老师是用的linear模式，仪器：FACS Canto II。那log个分析时自己改的。现换linea ...

1、我的建议是两群都圈。
2、你圈中的所谓CD4＋两群实际上是CD4＋和CD4－两群，左侧这群是碎片峰，所以比CD4－峰更低。
3、淋巴细胞只要刺激过，FSC和SSC基本上都会改变，所以建议圈门圈大一些。
4、如第1点回答，都圈。

niwanmao

你们是用什么仪器获取的？为什么FSC和SSC都用Log？

我看了下，大概了解了，因为经过刺激，细胞会发生变大或颗粒增多，所以大部分都是CD4＋细胞在右上区域，右下会少很多。这不是问题，只要你分析时圈中CD4＋即可。

建议都用FSC和SSC的Lin模式，不要用Log。

钢蛋儿

niwanmao 发表于 2016-1-29 15:21
你们是用什么仪器获取的？为什么FSC和SSC都用Log？

我看了下，大概了解了，因为经过刺激，细胞会发生变大 ...

谢谢老师！
1、我们流式老师是用的linear模式，仪器：FACS Canto II。那log个分析时自己改的。现换linea，请问这种情况该圈哪一群呢？



2、如果把散射门的两群都圈起来，就会出现下面的奇葩图形（两群CD4）。





3、其实根据常规PBMC，散射门一般是圈下面那群。我们流式老师起始就按的下面那群圈的，也是按照那群帮我分析的CD4、CD25、Foxp3。我回来分析的时候才发现不对劲。我现在散射门重新圈上群的话，Treg就特别糟糕。这结果还能用吗？

4、下次该圈出散射门哪一群继续分析Treg呢？

再次感谢！！

钢蛋儿

O(∩_∩)O谢谢老师！我也这么觉得，那这次检测估计白费了，因为他是按照下面的CD4群分析的Treg、、、