jc-1设阳性对照做什么用，需要设门么？

niwanmao

liqiong 发表于 2016-3-2 21:09
老师，我想问做流式的时候需要细胞计数么，这个细胞的数量对结果影响大么？
...

数量影响不大。

niwanmao

liqiong 发表于 2016-3-2 21:06
我忘记采集cccp组的数据了

CCCP组和DMSO组应该放在一起看才能对比的出来设门界限。

liqiong

这是那几幅图的原始数据，您看看

didi_zhou

感觉是补偿有问题。

liqiong

niwanmao 发表于 2016-3-2 21:12
CCCP组和DMSO组应该放在一起看才能对比的出来设门界限。

老师，我现在最大的问题是不会用cccp设门，先用正常细胞调参数怎样才算调好，cccp上流式时还要调参数么？还是用cccp只设门

niwanmao

liqiong 发表于 2016-3-18 16:57
老师，我现在最大的问题是不会用cccp设门，先用正常细胞调参数怎样才算调好，cccp上流式时还要调参数么？ ...

主要的标准就是将CCCP处理过的阳性对照调整到FL1强、FL2低的位置，在条件不变的情况下，看正常细胞（阴性对照）的位置应该在FL1弱而FL2强的位置。这就对了。

liqiong

niwanmao 发表于 2016-3-18 20:09
主要的标准就是将CCCP处理过的阳性对照调整到FL1强、FL2低的位置，在条件不变的情况下，看正常细胞（阴性 ...

那在设门的时候设十字门还是矩形门？

niwanmao

liqiong 发表于 2016-3-19 10:25
那在设门的时候设十字门还是矩形门？

不规则形门。

liqiong

niwanmao 发表于 2016-3-19 21:13
不规则形门。

老师这是我今天做的实验，我还是不会用cccp调节荧光补偿，不知道怎样才算将正常对照组与cccp组调开，cccp组上机以后是往图的左下方走而不是右下方，而且cccp组调节荧光补偿后，以前正常对照也会往调节的方向偏移，这不是就偏离原来的位置了么，那开始用正常对照组调节意义何在？
那以下是我的上机步骤
1、用胰酶消化（0.25%）
2、用原培养基终止消化
3、收集细胞，离心
4、吸去原培养基，加PBS清洗
5、离心
6、每管加staining buffer（37℃温热）
7、阳性对照加cccp 1μl，JC-1 1μl处理5min
8、其他组加JC-1 1μl 37℃避光孵育15-30min
9、离心，弃去staining buffer
10、加1mlPBS清洗，离心，吸出PBS
11、加新的PBS重悬，上机
12、用正常对照上机，将FL1荧光调节102（2为上角标）处，FL2调节到102——103处，将cccp上机，
求老师能给我一个正常对照调节图、cccp调节图、cccp调节以后的的图，我还不能明白画门的意义，不是用红/绿那个算数平均值比一下就好了么？