请教流式圈门

yangyang158658

file:///C:\Users\l\AppData\Roaming\Tencent\Users\286104748\QQ\WinTemp\RichOle\DXBBPXGUD(LC9D]AAP_RK(W.png大家好，这是我的用naive CD4 T诱导调节性T细胞的一张初始图。我想问这个门我应该是第一张的还是第二张的。我觉得细胞理论上都是naive T,所以不存在别的细胞，是不是应该选第一张？谢谢各位啦

yangyang158658

不好意思，我弄错了，是不是应该选择第二张？

niwanmao

yangyang158658 发表于 2016-3-2 16:42
不好意思，我弄错了，是不是应该选择第二张？

因为细胞培养后，部分细胞活化会出现FSC增大的情况，所以应该都圈。
建议最好将CD3圈门后，反过来看它们在FSC/SSC上的分布，如果分布在图2区域，那么就应该都圈。

yangyang158658

niwanmao 发表于 2016-3-2 21:00
因为细胞培养后，部分细胞活化会出现FSC增大的情况，所以应该都圈。
建议最好将CD3圈门后，反过来看它们 ...

哦。谢谢谢谢。我懂了。下次做染个CD3，然后圈出CD3的细胞后，就知道T是哪些了。但这样不是还有CD8吗？
还有问题想请教老师：我诱导 3天后发现细胞没有变化，没有FOXP3，也没有CD25。是怎么回事？（我的体系是：cells :beads为1:5；IL-2 100U/mL;TGF-beta:2ng/mL.96孔平底板每孔30万细胞）。
我想是不是我Fix/Perm后，每次洗的时候吹打的厉害，给吹成碎片了。

niwanmao

yangyang158658 发表于 2016-3-3 17:31
哦。谢谢谢谢。我懂了。下次做染个CD3，然后圈出CD3的细胞后，就知道T是哪些了。但这样不是还有CD8吗？
...

从图形看应该没碎。你检查一下破膜剂和抗体，可以先拿正常人外周血做个测试，正常人外周血CD4＋细胞中也有一定比例的Treg