关于flowjo软件的一些疑问？

那定

想请教一下:1、我目前在做的一个细胞因子需要破膜染色，用的是FITC、PE、PercP三种颜色，想调补偿但是破膜的话细胞形态会发生改变，而且本身细胞因子分泌量也较少，那我可不可以取这三种颜色的表面抗体，比如检测CD3、CD4、CD8也是这三种颜色加入到全血中，然后调补偿，调好的补偿可以用于我前面的PBMC破膜之后的数据中吗？2、为什么我在BDFACScantoII设的是收集10万个细胞，但导到flowjo10里面每一个样本的细胞数都比十万要多，而且通过Dot Plot设定细胞数只在图上有变化在后面统计里面没有任何变化，这是什么原因，是软件的问题还是我哪里没有操作到位？

niwanmao

1、可以。
2、你设置的收集10万个细胞是不是Stopping gate中的数量？

那定

是stopping gate中的细胞，另外如果我想取其中10000个细胞进行分析，应该怎么操作呢？用Dot Plot的话设置的话，后面统计里面还是显示原始细胞数量

niwanmao

那定 发表于 2016-3-8 21:52
是stopping gate中的细胞，另外如果我想取其中10000个细胞进行分析，应该怎么操作呢？用Dot Plot的话设置的 ...

两种方法：
1、设置Storage Gate，只存储门内的信号，门外的不存储。
2、全部存储，分析的时候可以选择%parent统计值。

facetodog

1、对于补偿调节是可以的，但是破膜后的胞内染色在样本检测和分析上最好保持所有对照和样品的处理都是一致的比较方便。
2、圈门分析然后parent统计值设小