找回密码
 加入流式中文网

QQ登录

只需一步,快速开始

查看: 6604|回复: 9

[结构和原理] Beckman 流式细胞仪-GALLIOS3激光十色,调电压、补偿操作问题

[复制链接]
发表于 2016-6-10 10:13:47 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
Beckman 流式细胞仪-GALLIOS3激光十色,调电压及补偿怎样操作?平时找实验室管理人员调,但反复找,他比较烦,也不好意思再麻烦。想学点具体操作,自己做个protocl.
1.样品3个指标: CD4-PE.    IFNr-E660     IL17-E450   单染   +空白对照  +   全染  共5管。
2.新建空白散点图、柱状图
3.按要求选择通道,输入参数
4.跑空白管,点击调节按钮,将细胞全部压缩至左下象限——这样电压就调好了吗?


5.单染管调补偿是把阳性细胞调到那个位置才合适?标准怎么定?





操作界面

操作界面
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2016-6-10 10:32:21 | 显示全部楼层
补偿是否为指标两两配对,如 CD4+FOXP4     CD4+CD45    FOXP3+CD45,分别调补偿
达到下图的水平,就OK了?


补偿标准

补偿标准
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2016-6-10 10:47:05 | 显示全部楼层
本帖最后由 farmer000 于 2016-6-10 10:48 编辑

补偿是否将两个单染样本混合后才能调出下图

2个单染管混合后图形?

2个单染管混合后图形?

调电压是否是这样,阴性细胞全在左下象限就行了?单个指标的电压调成什么样子呢? ... ...

调电压是否是这样,阴性细胞全在左下象限就行了?单个指标的电压调成什么样子呢? ... ...
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2016-6-10 11:11:08 | 显示全部楼层
空白管的电压调节只是参考,一般所谓的左下象限是并非固定区域,建议稍微调出来一些。
至于单阳性的标本如果有,那最好,如果没有,就用补偿微球实现,然后用标本微调。
我看你前面那个问题里面问的是测Treg和Th系列,这几类细胞应该分群很好,补偿也好调的。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2016-6-11 00:12:12 | 显示全部楼层
谢谢倪老师,我完全跟着别人走,自己一点都不懂。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2016-6-11 00:14:15 | 显示全部楼层
电压调节不懂。5个地方要调,是否1、2最重要,其他只是参考?
截图03.jpg
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2016-6-12 10:07:25 | 显示全部楼层
farmer000 发表于 2016-6-11 00:14
电压调节不懂。5个地方要调,是否1、2最重要,其他只是参考?

空白对照是用来调所有检测通道的电泳的。其中1、2是调节FSC和SSC的电压,使你的细胞显示在合适的位置。3、4、5用来调节荧光通道的电压,使未染色的细胞处在左边,但能把细胞都能显示出来。单染用来调节补偿,对于表达较弱的指标,可以用补偿微球,或者用相同荧光素标记的,但阴阳性能明显区分的。如IFNr-E660,可以用CD8-E660来调节该荧光素的补偿
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2016-6-12 21:30:52 | 显示全部楼层
bernie1023 发表于 2016-6-12 10:07
空白对照是用来调所有检测通道的电泳的。其中1、2是调节FSC和SSC的电压,使你的细胞显示在合适的位置。3 ...

谢谢指点!!!
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2016-6-13 13:36:12 | 显示全部楼层
farmer000 发表于 2016-6-11 00:14
电压调节不懂。5个地方要调,是否1、2最重要,其他只是参考?

其它几个通道的电压也很重要。我过两天会分享一个Cyto 2016年会上的Session。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2016-6-13 22:53:11 | 显示全部楼层
空白管  几个荧光通道的散点图上把细胞调节到全部显示出来不压线 且在左下角区域即可 只要你用到的通道都要调节     FSC和SSC调到细胞完全显示在你的视野内 并且使分群比较明显   我们以前CD4比较全  所以偶尔用它来调节补偿  但是一般都会根据经验  结合一些内参 平均荧光强度来调   另外补充一下  不用的通道最好关掉   

评分

参与人数 1流星 +1 收起 理由
niwanmao + 1 感谢分享

查看全部评分

组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则 需要先绑定手机号

手机版|流式中文网 ( 浙ICP备17054466号-2 )

浙公网安备 33038202004217号

GMT+8, 2024-12-25 09:07

Powered by Discuz! X3.5

© 2001-2024 Discuz! Team.

快速回复 返回顶部 返回列表