流式检测组织或血液中免疫细胞数量

泰国传奇

看到文献中经常秀出这样的图，不懂这种检测每mg某种组织或血液免疫细胞的数量的实验具体是怎么做的，一直以为都是只测百分比，请大神们指教。

niwanmao

流式的定量，既可以定相对数，也可以定绝对数。这里就是绝对数。

没看到文献的方法学部分，但是我估计应该是首先称组织重量，然后将组织充分粉碎成单个细胞悬液，测其中的Ly-6Chigh或low的单核细胞绝对浓度（这个可以加入绝对计数微球实现），最后乘以悬液的体积即可得到细胞总数，最后除以组织重量，就是1mg组织内的细胞数量。

泰国传奇

谢谢大神，文献方法学中写的比较简略，只写了用了哪些抗体。请问绝对计数微球公司有卖的是吗？大概多少钱？对仪器有要求吗？

niwanmao

泰国传奇 发表于 2016-6-19 19:52
谢谢大神，文献方法学中写的比较简略，只写了用了哪些抗体。请问绝对计数微球公司有卖的是吗？大概多少钱？ ...

绝对计数微球各个生物公司都有，价格千把块吧，与仪器无关。

泰国传奇

OK，非常感谢您！

泰国传奇

大神，假如我不用绝对计数微球，让流式仪将我最终的100ul单细胞悬液全部吸取计数，然后倒推回去除以组织重量可以实现上述的定量图吗？

chymanhz

泰国传奇 发表于 2016-6-20 09:39
大神，假如我不用绝对计数微球，让流式仪将我最终的100ul单细胞悬液全部吸取计数，然后倒推回去除以组织重 ...

因为样本会在管路里面残留，采用微球法的仪器是认为微球残留和细胞残留比例差不多，然后根据微球的计数来推断细胞的浓度。所以，用你这种方法会不准。除非你用的仪器本身支持体积法绝对计数，那么仪器本身有对于细胞残留有优化或者本身有个校准系数在里面。