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[标本处理] TUNEL(FITC单染)分析结果求助

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发表于 2016-7-6 09:34:02 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
本帖最后由 vivi主子 于 2016-7-6 10:17 编辑

用的TUNEL试剂盒,这是FITC-dUTP单染的结果,我想请问是不是细胞都被处理坏了?是什么原因呢?
第一个图:是用流式仪自带的“analyze”做的,从左到右分别是阴性对照、实验、阳性对照,这么划门对吗(阴性组:1.1%、实验组:15%、阳性组:83%)?实验组的那个门怎么没有恰好在第一个峰和第二个峰交界处,这样可以吗?阴性对照组和实验组的第一个峰怎么没有重合?
不胜感激!谢谢!

analyze分析阴性、实验、阳性

analyze分析阴性、实验、阳性

collect图

collect图
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发表于 2016-7-6 16:07:50 | 显示全部楼层
从FSC和SSC散点图看,几乎都成碎片了,圈中的这15%估计状态也不能,未必能反映真实结果呢。
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 楼主| 发表于 2016-7-6 16:17:51 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-7-6 16:07
从FSC和SSC散点图看,几乎都成碎片了,圈中的这15%估计状态也不能,未必能反映真实结果呢。 ...

谢谢老师,老师,我这个没有染PI,一定要染PI吗?染PI后是要加一个以PI为横坐标,count
为纵坐标的图吗?谢谢!
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 楼主| 发表于 2016-7-6 16:19:48 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-7-6 16:07
从FSC和SSC散点图看,几乎都成碎片了,圈中的这15%估计状态也不能,未必能反映真实结果呢。 ...

老师,我看到了您之前发的图片,但是我不知道,您那个是染了PI吗?横坐标、纵坐标分别是什么也不懂?
谢谢老师!
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发表于 2016-7-6 18:09:58 | 显示全部楼层
vivi主子 发表于 2016-7-6 16:19
老师,我看到了您之前发的图片,但是我不知道,您那个是染了PI吗?横坐标、纵坐标分别是什么也不懂?
谢 ...

加了PI可以了解哪个周期发生了DNA断裂。不加也是可以的。
你如果真要分析,就以细胞群分布设门,不用管对照的位置,因为细胞状态不好的时候,你的对照就失去了参照意义了。
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 楼主| 发表于 2016-7-7 10:02:48 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-7-6 18:09
加了PI可以了解哪个周期发生了DNA断裂。不加也是可以的。
你如果真要分析,就以细胞群分布设门,不用管对 ...

好的,谢谢老师!老师但是我看到有篇文献是这样说的,我不明白是做一个点图还是直方图?横坐标、纵坐标分别是什么?谢谢!
Gating was performed on red(P1 stain) versus log green (FITC-avidin) cytograms to separate cells from debris in the creation of the green fluorescence frequency histograms. In some instances, the cells and debris were indistinguishable at the higher channels.
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发表于 2016-7-7 10:54:53 | 显示全部楼层
vivi主子 发表于 2016-7-7 10:02
好的,谢谢老师!老师但是我看到有篇文献是这样说的,我不明白是做一个点图还是直方图?横坐标、纵坐标分 ...

这篇文献里面的双染,FITC-avidin和PI双染。
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 楼主| 发表于 2016-7-11 09:35:28 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-7-7 10:54
这篇文献里面的双染,FITC-avidin和PI双染。

谢谢老师。老师我看了其他文献,有的也是这么说,他不是指的圈出PI染上的部分,然后做FITC的直方图吗?
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发表于 2016-7-11 19:01:36 | 显示全部楼层
vivi主子 发表于 2016-7-11 09:35
谢谢老师。老师我看了其他文献,有的也是这么说,他不是指的圈出PI染上的部分,然后做FITC的直方图吗? ...

用PI可以测出DNA含量,从而可区分各个细胞周期,并将细胞与碎片分开。这样有助于分析真正的细胞或者分周期分析。分析步骤可你需要,不是圈PI染上的部分,而是按照细胞周期分析那样圈出细胞部分,再分析FITC
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 楼主| 发表于 2016-7-11 20:44:07 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-7-11 19:01
用PI可以测出DNA含量,从而可区分各个细胞周期,并将细胞与碎片分开。这样有助于分析真正的细胞或者分周 ...

谢谢老师!老师讲的真详细,谢谢老师!
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