用CFSE法检测T淋巴细胞的增殖

hwxs

                               
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上图是我近期用CFSE法检测T细胞增殖的图，左图为裸细胞，右图为5 μg/ml ConA刺激细胞三天过后的图。我用ELISA检测了细胞上清的IL-2的表达量很高，可是从流式的图上却看不到增殖。我想请教一下会不会是在调参数的时候调过了呢。电压为479。还请各位大神指教呢。我是新手，还不懂呢~

niwanmao

没看到图，可通过编辑帖子上传图片。

此外，CFSE的相关protocol可搜索本站。

千万不要做关联性想象，认为某某指标高就肯定会发生什么什么，如果这么肯定，是不是只要测一个指标就OK 了呢？那就不能算科研了。

hwxs

不是呢，因为IL-2是可以刺激T细胞增值的，之前我也做过CFSE这个实验，阳性对照组是出来好几个峰的~这次连阳性对照都没有出来~我想不明白了呢，而且刀豆素我用的是从sigma公司新买来的呢。

niwanmao

hwxs 发表于 2016-7-25 11:58
不是呢，因为IL-2是可以刺激T细胞增值的，之前我也做过CFSE这个实验，阳性对照组是出来好几个峰的~这次连阳 ...

以前的结果和这次的结果数据文件是否可以传上来对比看看。

hwxs

老师，关于测样我有几个问题想请教一下您。1、做双染的时候，是不是在上机测样的时候一定要画十字门，单独画FL1和FL2的一字门是不行的呢？
2、如果FL1通道的表达很高在90%以上，而FL2通道的表达量也挺高，也大于85%，并且FL2通道中的阴性区的细胞也不少，我尝试调了一下补偿，发现不太对，就不知道这么弄了。
还请您帮忙解答一下呢。

niwanmao

hwxs 发表于 2016-7-26 08:04
老师，关于测样我有几个问题想请教一下您。1、做双染的时候，是不是在上机测样的时候一定要画十字门，单独 ...

双染的话，建议画双参数散点图对于设门更好，更精确。直方图不是绝对不行，但对于一些分布不太好的，直方图就圈不准了。

至于第2个问题，我不明白什么回事，你是指补偿调不好吗？你调到了多少，应该调得好的呀。

qingfeng92

FSC，SSC电压调高了，目标细胞群跑过了。我现在使用的电压是FSC 120，SSC450

niwanmao

qingfeng92 发表于 2016-8-8 10:55
FSC，SSC电压调高了，目标细胞群跑过了。我现在使用的电压是FSC 120，SSC450

不同仪器不一样的，而且即使同一仪器也会不同，不过有一定参考意义，谢谢分享^_^

qingfeng92

niwanmao 发表于 2016-8-8 16:04
不同仪器不一样的，而且即使同一仪器也会不同，不过有一定参考意义，谢谢分享^_^ ...

确实是这个道理，我用的是 BD Canto Plus

niwanmao

qingfeng92 发表于 2016-8-8 16:09
确实是这个道理，我用的是 BD Canto Plus

哦，是十色至尊版吗？