染过色的细胞不能及时上机检测，该如何保存？

实验猿

因为流式细胞仪使用地人较多，经常遇到细胞染好色之后不能及时上机检测，该如何保存才能避免荧光减弱？用4%的缓冲甲醛溶液重悬细胞可以吗？

niwanmao

首先，尽量事先安排好工作，例如事先预约好时间，安排染色。
其次，如果确实被人家挤掉了，那么可以考虑用1％的多聚甲醛固定，但强烈建议事先对比过。

我们上周有一个标记好的标本，没有进行任何固定，获取完发现没有取好，等发现的时候已经第二天了，幸好样本还在，然而没有避光。只好抱着试试看的心态上机，结果发现荧光几乎无影响，分群依然良好。当然，我不是鼓励大家这么做，毕竟还是有很大风险的。只是想说明，有时候，流式标本实际上并没有我们想象的那样脆弱。

实验猿

每次做之前都会预约时间，但是有时候到时间了别人做不完，可能就要多等一个多小时。我用4%的缓冲甲醛溶液固定后发现荧光信号比没有固定的要高一些，但不知道具体原因，毕竟也只是这样做过两次。是不是如果能在染完色的两个小时内测样就不用固定了？我用的是Alexa Fluor647染料。

niwanmao

实验猿 发表于 2016-11-30 09:30
每次做之前都会预约时间，但是有时候到时间了别人做不完，可能就要多等一个多小时。我用4%的缓冲甲醛溶液固 ...

是会高一点，可以将多聚甲醛浓度降到1％，会好一些。

如果2小时内检测，不需要固定，只要避光即可。

实验猿

好的，谢谢倪老师！