请问哪位高人能介绍下怎么样检测一个抗体能不能用来做.....

Justin-威 · 发表于 2016-12-17 15:30:22

请问哪位高人能介绍下怎么样检测一个抗体能不能用于流式检测，比如有CD3的未标记抗体，怎么样设计实验来验证这个抗体能做流式检测。我现在有直接标记的FITC-CD3，也有未标记的CD3和FITC的二抗，就是想检测这个抗体能不能做流式

小憨 · 发表于 2016-12-17 15:30:23

若你的假设是：CD3直标的抗体是已知可以做流式的抗体，另外一个未标记的抗体是要验证的抗体的话，建议再配一个PE的二抗，然后进行下面的操作。先孵育未标记的抗体（抗体浓度不要太高），然后孵育二抗，充分洗干净细胞（比如洗5遍）再孵育直标的抗体；上流式细胞仪检测。若两种只有双阳性和双阴性细胞存在，没有单阳性细胞存在，就说明这个未知抗体跟已知抗体识别的抗原可能是一样的。

niwanmao · 发表于 2016-12-17 18:49:17

找已知阳性表达该标记的细胞。

Justin-威 · 发表于 2016-12-17 21:41:05

那要是不清楚这个抗体是不是就是cd3的特异性抗体，就是不是最好用WB和流式两种检测方式来验证这个抗体就是特异性的CD3
抗体，而且也能用来做流式

niwanmao · 发表于 2016-12-18 11:21:21

Justin-威发表于 2016-12-17 21:41
那要是不清楚这个抗体是不是就是cd3的特异性抗体，就是不是最好用WB和流式两种检测方式来验证这个抗体就是 ...

可以知道的啊，例如你要测CD3，那么就拿正常人外周血来测，淋巴细胞应该60～80％阳性，而单核细胞、粒细胞应该阴性，这样就可证实抗体是特异性的。

Justin-威 · 发表于 2016-12-18 19:38:02

这也是一种思路，学习了，都是大神

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