全血标本体外刺激培养后出现纤维蛋白凝块，求解！

shengsl2002

测人外周血TH17细胞， 用CD4+/IL-17A方案。发现血标本在体外加刺激剂培养4小时后，出现纤维蛋白凝块，请教解决方案。
我的实验方案：
① 肝素钠真空抗凝采血管取人外周血全血 1-2ml 。
② 每个样本管 ( 流式管 ) 分别加入 100μl 全血， 用 RPMI1640( 不含小牛血清 -FBS)1:1 等体积稀释。
③ 向稀释后的全血样本管加入 0.4μl CellStimulation Cocktail (plus protein transport inhibitors)(500X)(eBioscience Cat.No.00-4975)，混匀。（说明书要求2ul/ml,我的体积为200ul所以加了0.4ul）
④ 5％CO2 、37℃孵箱内培养4h。

shengsl2002

情况补充：1. 我将全血，培养液，刺激剂成比例放大，比如500ul全血，加500ul不含血清1640，加2ul刺激剂，37度，5%CO2培养4小时，仍然出现纤维蛋白凝块。2. 刺激剂减半量，也出现纤维蛋白凝块。3.不加刺激剂，同样条件培养则不出现纤维蛋白凝块。

niwanmao

这个帖子后面两位站友提出了两个解决方法，请参考一下：
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4541-1-1.html
貌似肝素你已经采用了，DNaseI 你试试

shengsl2002

非常感谢倪老师回复！我再试试，有结果以后反馈。