未染色和同型对照都正常，而染色抗体的信号贴壁很严重

vivic5015

上面四张图分别是FSC／SSC，FITC未染色、FITC同型对照和FITC染色抗体（小鼠肺细胞）。未染色和同型对照都正常，可染色后有40%的细胞信号都贴壁了，这是怎么回事？除了FITC，还染了PE，7AAD，PC7，APC，Alex700。在调补偿和FMO的时候发现，只要有PE在，FITC的信号（不论是同型对照还是抗体）就会出现这种贴壁现象。此外，7AAD也有这个问题，有PE在，7AAD的同型对照和抗体的信号就会贴壁。这是哪里出问题了吗？是补偿没调好吗？从FSC/SSC图可以看出有3团细胞，我分别圈出这3团细胞看它们的FITC信号，发现左边的两团细胞90%以上都贴壁了，而右边那一团细胞有20%左右贴壁，所以第4张图上的那团细胞基本上就是FSC/SSC图中的右边那一团细胞。

niwanmao

多色实验中，这些过强的信号可能都是非特异信号，需去除。建议改用不同的荧光标记散点图，观察这些信号在什么位置。

vivic5015

您说的“过强的信号”是指哪个？怎么去除？
Flow Jo上怎么用不同的荧光标记散点图？谢谢！