标记不同染色剂的同一种CD3抗体，加到一管细胞中孵育，.....

特勒兮兮

本人由于失误在同一管细胞中同时加入了FITC-CD3和percp-CD3，后面又做了一管只加FITC-CD3的，两个结果对比，发现同时加入不同通道CD3抗体的和只加了第一通道的结果没有区别，这是为什么呢

niwanmao

来个图看看？你是指加入两个的是双阳性？

特勒兮兮

niwanmao 发表于 2017-3-2 19:26
来个图看看？你是指加入两个的是双阳性？

http://a3.qpic.cn/psb?/V134e58o3 ... f=photolist&t=5
http://a1.qpic.cn/psb?/V134e58o3 ... NA!&rf=viewer_4

特勒兮兮

niwanmao 发表于 2017-3-2 19:26
来个图看看？你是指加入两个的是双阳性？

有点不会上图，就是一个管子里同时加了第一通道和第三通道的CD3，两个带不同荧光素的相同抗体结合CD3分子之后阳性率不是都会变低吗

niwanmao

特勒兮兮 发表于 2017-3-3 09:29
有点不会上图，就是一个管子里同时加了第一通道和第三通道的CD3，两个带不同荧光素的相同抗体结合CD3分子 ...

这不一定，首选看克隆号是否相同，其次，即使克隆号相同，因为同时加进去，所以也会发生竞争性结合而出现每种细胞上都出现两种标记阳性。

特勒兮兮

niwanmao 发表于 2017-3-3 19:41
这不一定，首选看克隆号是否相同，其次，即使克隆号相同，因为同时加进去，所以也会发生竞争性结合而出现 ...

我想问的是这个，假如该细胞样本CD3阳性率为100%，如果是竞争性结合的话，理论上那么不是应该FITC-CD3+PercpCD3=100%吗，而现在出现的情况是FITC-CD3和Percp-CD3都是100%

特勒兮兮

niwanmao 发表于 2017-3-3 19:41
这不一定，首选看克隆号是否相同，其次，即使克隆号相同，因为同时加进去，所以也会发生竞争性结合而出现 ...

如果这两个抗体一样都是抗CD3的抗体，只是克隆号不一样的话，他们都会结合同一细胞上面的不同抗原表位，所以他们的阳性率是一样的？

小憨

特勒兮兮 发表于 2017-3-6 09:46
我想问的是这个，假如该细胞样本CD3阳性率为100%，如果是竞争性结合的话，理论上那么不是应该FITC-CD3+Per ...

这个很好理解呀，假如一个T细胞上有100个CD3分子，你只要标记十个CD3分子就足够分辨出来了，那你两种抗体上各标记了20个，还剩下60个呢；就算是100个都被沾满了，因为抗体是同时加入的，所以理论上也是各50个。
你要搞清楚，统计指标是要计算阳性细胞的个数，还是要计算某个分子的表达强度。前者是通过比例表示的（百分数），后者是通过计算平均荧光强度得来的。