流式分析左下角细胞过多

Vivivivi

在做流式分析的时候，确定目的细胞群的时候发现左下角细胞非常多，跟老师分析应该不是正常的细胞，是细胞碎片或者死细胞，不知道是哪里出的问题，是处理细胞不正确？是用胰酶消化完以后，加PBS重悬，然后1500rpm离心5min，然后重复两遍。处理完以后上样。我们做的细胞是胃癌细胞823和7901细胞，请问哪位高手知道问题出在了哪里？求指教！！！

niwanmao

实体肿瘤消化后，再进行离心，本身容易产生碎片，只需将其排除掉，并且使用死活鉴别染料（PI或商品化的Live/dead）即可圈中活细胞。

Vivivivi

niwanmao 发表于 2017-3-7 18:52
实体肿瘤消化后，再进行离心，本身容易产生碎片，只需将其排除掉，并且使用死活鉴别染料（PI或商品化的Live ...

可是细胞数量明显的降低了好多，是打算流式分选的，上样前处理细胞然后做分析时可以鉴别出正常的细胞，可是关键是碎片细胞数量太多，不知道问题出在了哪里

niwanmao

Vivivivi 发表于 2017-3-7 19:17
可是细胞数量明显的降低了好多，是打算流式分选的，上样前处理细胞然后做分析时可以鉴别出正常的细胞，可 ...

你还没有明白我的意思，因为消化、离心这两步对实体组织细胞影响很大，所以碎片很多，碎片从哪里来，就是细胞分裂来的，所以活细胞减少是必然的，无法避免的。
只能说，你需要尽量优化消化浓度、时间、离心速度等步骤，使活细胞的比例尽量高一些。

Vivivivi

niwanmao 发表于 2017-3-7 19:34
你还没有明白我的意思，因为消化、离心这两步对实体组织细胞影响很大，所以碎片很多，碎片从哪里来，就是 ...

哦哦哦，我懂你的意思了，你的意思是这是客观因素造成的，我只能从一些晓得方面尽量减弱，但是细胞碎片还是会很多的无法避免对吧？万分感谢！

niwanmao

Vivivivi 发表于 2017-3-7 19:47
哦哦哦，我懂你的意思了，你的意思是这是客观因素造成的，我只能从一些晓得方面尽量减弱，但是细胞碎片还 ...

是的，因为每个人做的样本不同，所以其它人的条件未必适合你，只能根据条件摸索一下。