流式数据分析问题，自发荧光还是杂质？

小鲫鱼abc

大家好！本人刚接触流式细胞仪，对得到的数据不是很懂。实验是通过SYBR-GREEN I和PI双染法染色菌体，得到菌的死亡率。四张图是同一种菌，A1是未染色的空白组和A1-1是染色的实验组，B1和B1-1同理。A1-1和B1-1的培养条件稍有不同，取样操作过程完全一样。1. 为什么B1空白组的自发荧光这么强？
2. 根据B1来画门，这样B1-1的Q4（阴性区）就有好多东西，这些东西都是碎片还是别的杂质呢？

3. 划分门的方式有没有问题？
求大神指导！

chymanhz

数据要购买才能看啊，那估计没人帮你看呢

小鲫鱼abc

chymanhz 发表于 2017-3-22 11:43
数据要购买才能看啊，那估计没人帮你看呢

不好意思设错了，那请问要怎么解除这种设置呢？

小鲫鱼abc

抱歉一开始设置错了，这是附件的图片，重新上传了~望各位大神指点！

niwanmao

小鲫鱼abc 发表于 2017-3-22 12:26
抱歉一开始设置错了，这是附件的图片，重新上传了~望各位大神指点！

设在如下图红线附近。B1的分布应该跟细胞活力、细胞物理特性均有关。

小鲫鱼abc

niwanmao 发表于 2017-3-22 16:36
设在如下图红线附近。B1的分布应该跟细胞活力、细胞物理特性均有关。

这样的设法的依据是什么呢？
我之前都是用未染色的组作为背景值，把它们划在Q4区域里，然后再将这个门移植到染色组上的，这样有没有问题？

niwanmao

小鲫鱼abc 发表于 2017-3-22 19:29
这样的设法的依据是什么呢？
我之前都是用未染色的组作为背景值，把它们划在Q4区域里，然后再将这个门移 ...

1、参考你另一个阳性标本的分群情况。
2、你这个标本其实就存在比较好的分群，只是你可能感觉不到。

用未染色设门本身就是错误，站内以前发过不少帖讲过，生物学阴性对照在最好的设门对照，未染色标本的作用是调节电压，而非设门。

小鲫鱼abc

niwanmao 发表于 2017-3-22 21:28
1、参考你另一个阳性标本的分群情况。
2、你这个标本其实就存在比较好的分群，只是你可能感觉不到。

老师，我把全是死菌作为阴性对照，出来的图都被PI染上了，设门的界限就以被PI染的那块区域为界吗？