细胞的整体偏移算阳性么？阳性的判定标准是什么？

小青菜

实验室自己制备了IL-2的单抗，想将它应用于流式检测。①但检测结果和一般的出现细胞分群不同，刺激组的细胞整体向右偏移。想请教下这算不算阳性。②一个实验（胞内细胞因子染色）需要哪些对照（不需要补偿），同型和未刺激组够了么？③同型对照的使用 说明书上写着2ml 100test 是不是一次试验要加二十微升。希望大家能帮解答。 整体偏移的图片如下

niwanmao

厉害。
不过看起来分群不好，是否意味着结合能力欠佳？或者破膜效果不佳？

同型对照用量要看浓度，还要匹配球蛋白亚类。

小青菜

niwanmao 发表于 2017-4-3 18:42
厉害。
不过看起来分群不好，是否意味着结合能力欠佳？或者破膜效果不佳？

那这算阳性么

小青菜

niwanmao 发表于 2017-4-3 18:42
厉害。
不过看起来分群不好，是否意味着结合能力欠佳？或者破膜效果不佳？

那这算阳性么 还有老师能推荐一下染色管么 我都是用1.5ml离心管染色的

niwanmao

小青菜 发表于 2017-4-3 20:21
那这算阳性么

挺难说。我的建议是因为你们打出来的抗体无法确定是否有效，建议购买一个市场口碑或者文章中使用较多的、质量可靠的抗体做对照，这样更好。

a86856635

加高尔基体阻断剂了吗

whyxa

有几个问题我想了解一下，1，你的二抗是用的什么颜色，2，你的细胞是PBMC还是纯化的T细胞，3，有没有加阻断剂，4，同型对照组是用的那组细胞做的，怎么做的。5，你是否比较了你的单抗IgG类型和同型抗体一致

小憨

先回答你的问题，整体偏移算阳性，但是你的样本偏移的……有点儿小……
另外，像倪老师说的，建议试验设计加个阳性对照组，也就是买一个市售IL-2抗体，然后在相同的条件下染色，对比一下结果。如果买的抗体分群很好，你的抗体分群不好，即使你的抗体存在整体偏移，也表明你的抗体效价不如市售抗体。如此，要考虑一下应用条件什么的，看看能不能用于WB之类的实验。

小青菜

a86856635 发表于 2017-4-5 13:30
加高尔基体阻断剂了吗

加了 这应该和阻断剂关系不大吧