流式细胞仪 PI单染区分死细胞和活细胞

xxy281167

在流式细胞术中，用PI单染法区分死细胞和活细胞，测定细胞存活率，怎么看实验数据结果？

774055480

你这是周期图啊

niwanmao

是的，就像@774055480  所说的，你可能按照细胞周期来标记细胞了吧？
标记死活的PI染液没有RNA酶，并且PI浓度也低很多，大多采用10ug/ml PI染液，加5-10ul，作用1分钟即可上机检测。

xxy281167

因为细胞未经乙醇固定，那这可以把左侧峰作为活细胞，右侧作为死细胞吗？

niwanmao

xxy281167 发表于 2017-4-22 11:15
因为细胞未经乙醇固定，那这可以把左侧峰作为活细胞，右侧作为死细胞吗？ ...

如果时间不太长，并且染色浓度不高，可以这么算。但如果时间太长，即使活细胞也可能会被染上。

Justin-威

niwanmao 发表于 2017-4-21 22:06
是的，就像@774055480  所说的，你可能按照细胞周期来标记细胞了吧？
标记死活的PI染液没有RNA酶，并且PI浓 ...

想问下倪老师，最近在做组织细胞的流式，用的网搓法和酶消化结合的方式制备细胞悬液，因为有很多死细胞和细胞碎片影响结果，我可不可以在染了膜抗原之后再染下PI，用来区分死细胞。另外PI染料配成10μg/ml的工作液后怎么保存以及可保存的期限

niwanmao

Justin-威 发表于 2017-4-24 09:51
想问下倪老师，最近在做组织细胞的流式，用的网搓法和酶消化结合的方式制备细胞悬液，因为有很多死细胞和 ...

可以的。
PI染料还是很稳定的，但具体多久，我也说不好。

dlynne

niwanmao 发表于 2017-4-23 16:02
如果时间不太长，并且染色浓度不高，可以这么算。但如果时间太长，即使活细胞也可能会被染上。 ...

老师好！如果用PI染色分选活细胞，分选6个小时左右这算不算时间长？会不会活细胞也染上了？谢谢！

niwanmao

dlynne 发表于 2017-12-26 11:34
老师好！如果用PI染色分选活细胞，分选6个小时左右这算不算时间长？会不会活细胞也染上了？谢谢！ ...

终浓度1ug/ml，应该不会有大问题。