有关Th17细胞的检测

niwanmao

标题：有关Th17细胞的检测

niwanmao老师您好!

我用三种抗体即CD3,CD8,IL-17A同时检测外周血和结肠癌组织中的Th17细胞,外周血用Ficoll分离出淋巴细胞后进行检测,结肠癌组织用机械法和酶法消化组织后用Percoll分离出肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)后进行同样的三种抗体标记. 不过,我用的是血中分离的淋巴细胞来调节荧光补偿后建立起模板,而用组织分离的TIL做流式细胞收集和分析时都是采用的已建立的模板（即用血中分离的淋巴细胞建立的模板）, 每次电压和荧光补偿都已进行适当调整，可是出来的结果有所差异,即血中分离的两团细胞CD8+T细胞和CD8+阴性细胞(CD4+T细胞群)分界明显,而从组织中分离的这两团细胞却没有分界线,呈现连续的一团细胞群(分别见图1和图2的第三张图),而血和癌组织中的CD3群分界都很明显,不知是什么原因造成的,问了一些人他们也解释不清. 因此，请老师解释这两团细胞在组织中为什么分不开? 这究竟是不是正常现象?如果不是正常现象, 应采取什么办法才能分开这两团细胞?请老师赐教,不胜感激!!

 

 由于图片传不上去,只好发到[email]niwanmao@gmail.com[/email]邮箱.

 

 

回答者：niwanmao

首先说一下上传图片的问题。由于你的图片在Word文档里面，你上传的时候选择了Word文档，当然传不上来。你需要通过Word的另存为网页命令，保存类型选择“网页”，这样里面的图片才能出来。你要上传图片格式的文件，不能上传Word文件，切记。

其次，在这里贴一下你的两张图片。
结肠癌组织的Th17细胞检测结果图

同一患者外周血淋巴细胞Th17细胞检测结果

最后回答你的问题：
癌组织的CD8分不开是由于标本处理方式的问题，由于机械法和化学法均会影响到细胞形态，而形态的改变，最容易影响FL1和FL2两个通道的荧光，而你的CD8刚好是FITC，因此就出现这种分不开的情况，而CD3是PE-CY5，就不会。

所以，解决方法，就是把CD8改成APC标记的。

2009年8月12日 0:54