听说过Dark-field flow cytometry吗？

niwanmao

以前听说过dark-field microscopy，显示微小生物很有帮助，如下面的动画中，就是利用此方法显示出人体外周血中的微生物（动画900KB左右，注意在动的那团特别亮的，就是细菌）：


搜了下关于Dark-field中文百科：

暗场显微镜技术是利用斜射照明法阻挡透过标本细节的直射光，以反射光和衍射光来观察标本。在普通显微镜下直射光透过标本的时候，一部分光被吸收，另一部分光透射或折射，形成标本细节内部结构的真实投影。因此，在普通显微镜下所看到的是物体形态和结构。而在暗场显微镜下从侧面照射到物体的光束，绕射或反射造成物体外形的侧影。因此暗场显微镜下所看到的只是物体的轮廓或物体的运动。
普通显微镜下可以看到0.45um的细节，而暗场显微镜下竟能看到0.2-0.004um的极微小物体。这个范围的物体叫亚粒子,因此暗场显微镜也可以称裂隙限外显微镜。
暗场显微镜特别适用于胶体化学领域中观察溶质粒子的布朗运动，适用于观察原虫、细菌的鞭毛、伪足运动，医学检验学范围适用于观察人体体液中螺旋体、尿管形、结晶或各种粒子.在这一点上，暗场显微镜远比其他种类显微镜要优越得多。

大致了解了dark-field的优点之处，在于注重轮廓，不注重细节，所以对大小的反应就特别灵敏了，那么回到流式上面，其光路结构是咋样的呢？网上一顿搜，但是发现资料很少，没有一篇完整的说明和解释，只大概看下来，发现该技术原来是imaging flow cytometry的专利之一，似乎目前有几款比较偏的流式细胞仪也开始配置了这种光路（如下图），看结构似乎在激发光这边有一个Dark Spot，激发液流中的细胞后，发射光接收方向还是有一个Dark Field，就是将直射的光基本上都挡住了，只让折射光通过：



如此，常规流式一般检测低限在200nm，而且一般800nm以下就分不大开了（如下图下半部分），而dark-field flow cytometry看到0.2、0.4、0.5、0.6、0.8um都分得挺漂亮。


有意思！这样对于微颗粒的检测可能就不一定需要微球了吧。有了解dark-field flow cytometry更多细节的同学，欢迎留言。