流式细胞仪定量分析大肠杆菌死亡率

amnesiamber

我在做一个有杀菌功能的材料，实验以大肠杆菌为代表菌种。我想通过流式细胞仪确定其杀菌效果，初步想法是SYTO和PI双染来看活死细菌比例，想请问老师，这两种染料是否合适，浓度应该为多少合适？还有就是对于双染法要设置什么参数？由于初涉流式细胞术，没有查到详细的资料，麻烦老师指点迷津，谢谢！


想做出这种结果

niwanmao

每个菌种都不同，Syto染料还是需要自己摸条件的，不过也可以参考说明书嘛。

PI的话，可以参考哺乳动物的条件看看：10ug/ml PI染液，加5-10ul，作用1分钟即可上机检测。

wmj123456

倪老师，说明书上用SYTO 9/PI染色大肠杆菌，是分为3群的，有背景噪音或者是过渡阶段的细菌。上面图中是明显分为2群，即活菌和死菌，我最近做的也是这个样本，也是这样的流式图，我觉得这是由细菌状态决定的，这个结果是合理的哈？

wxd

这种实验我之前经常做。SYTO9用量一般是正常接种，过夜培养细菌稀释50-100倍后，1mL细菌悬浮液加1微升浓度为5 mM的SYTO9。
死活细菌不一定会分为3群，如果细菌悬浮液中没有杂质时，是没有杂质群的。
至于你的结果准不准确，可以验证一下：取正常培养的细菌（一般认为都是活菌），取一部分煮沸杀菌，然后与活菌按照特定比例混匀，得到死细胞比例已知的样品，染色后上机检测，看与预期是否相符。