流式抗体与阻断抗体竞争结合问题

holmes27

比如DC细胞预先加了CD1a的胞外段阻断抗体，占据了CD1a的结合位点，此时再用流式抗体染CD1a的话，是不是通常都会检测值偏低？影响结果？怎么处理这方面问题？一般阻断抗体可以查到具体的结合位点，但流式抗体很难查到，怎么排除相互竞争带来的对检测结果的影响？

niwanmao

一般都会影响到的，即使位点不同，也会出现空间位阻的。
流式抗体的结合位点可以通过其克隆号查询到。

如果要避免相互竞争造成的影响，可能只能继续培养一段时间，使CD1a自然脱落了。

holmes27

niwanmao 发表于 2017-10-7 10:57
一般都会影响到的，即使位点不同，也会出现空间位阻的。
流式抗体的结合位点可以通过其克隆号查询到。

非常感谢倪老师！您说的CD1a自然脱落是指抗体还是？

niwanmao

holmes27 发表于 2017-10-9 01:25
非常感谢倪老师！您说的CD1a自然脱落是指抗体还是？

指的是抗体。这个就跟流式分选、磁珠分选后的抗体脱落一个道理。

wlting

niwanmao 发表于 2017-10-9 08:59
指的是抗体。这个就跟流式分选、磁珠分选后的抗体脱落一个道理。

倪老师，细胞分选得到的细胞进行体外培养时，细胞上面的抗体怎么办呢？对细胞活性和其他性质有影响吗？我看您说的流式分选后抗体的脱落，这个是什么样的情况呀？因为要做到啊细胞分选体外培养细胞，一些东西不是很懂，所以想跟老师请教一下，

niwanmao

wlting 发表于 2017-10-10 10:19
倪老师，细胞分选得到的细胞进行体外培养时，细胞上面的抗体怎么办呢？对细胞活性和其他性质有影响吗？我 ...

分选后，你就按照正常流程进行培养，在37度培养时抗体会很快自然脱落，不会影响的。

wlting

niwanmao 发表于 2017-10-12 08:19
分选后，你就按照正常流程进行培养，在37度培养时抗体会很快自然脱落，不会影响的。 ...

倪老师，有没有一种情况，比如细胞表面的BCR，用IgM抗体筛选出阳性细胞后，体外培养，与细胞膜结合的IgM抗体，会不会对细胞产生一种活化作用，使下游的的分子被激活，细胞活化后分化呢？

niwanmao

wlting 发表于 2017-10-17 21:47
倪老师，有没有一种情况，比如细胞表面的BCR，用IgM抗体筛选出阳性细胞后，体外培养，与细胞膜结合的IgM ...

理论上似乎不能完全排除，但实际上应该没那么容易吧，就像CD3分选T细胞的话，那么按照理论，T细胞也应该会被活化，但现在分选T细胞应该也都是用CD3吧。