请问谁有钙流检测的中文版fluo-3AM

lgfffancy

缺乏背景知识，英文那个版本实在有些看不懂，谢谢~

niwanmao

哪个版本看不懂？我翻译给你看。

lgfffancy

niwanmao 发表于 2017-10-7 10:58
哪个版本看不懂？我翻译给你看。

so nice of you， what a big surprise！
TITLE: Measurement of Intracellular Calcium Ions UNIT 9.8 by Flow Cytometry
Passages：USE OF FLUO-3 AND FLOW CYTOMETRY TO MEASURE CELLULAR
CALCIUM CONCENTRATION
Note：desperately wanna how to detect the change of Ca current（the specific steps of this detection，my reagent is FLUO 4 AM）,and how to analyze the FACS data.
Thanks a million,

niwanmao

lgfffancy 发表于 2017-10-7 12:14
so nice of you， what a big surprise！
TITLE: Measurement of Intracellular Calcium Ions UNIT 9.8  ...

英语这么好还说看不懂。好吧，大致步骤如下：

使用FLUO-3和流式细胞仪测量细胞钙浓度

Fluo-3是由Minta等研发的基于荧光性钙离子探针（1989年）。 使用该探针可以在没有配备紫外线光源的流式细胞仪检测钙离子。
染料：10mg/ml fluo-3乙酰氧甲基酯（fluo-3 AM）


1、在12×75mm聚丙烯管中收集淋巴细胞，并以180×g室温离心6分钟。 将细胞以10E6至10E7个细胞/ml重悬于细胞培养基中。
2、可选：加入100 mM丙磺舒至4 mM。
丙磺舒可以通过最小化fluo-3AM的泄漏来改善细胞染色和减少细胞间染料含量的差异; 磺胺吡酮也可以用。
3、加入10mg/ml fluo-3 AM，使终浓度为3至4μg/ml。 在30℃或37℃孵育30分钟。
4、以180×g室温离心6分钟。 以细胞培养基重悬，细胞浓度约3×10E6/ml。 上机分析。
5、流式细胞仪需要配置有488nm激发光光源，需在525nm波长收集钙离子信号。
6、通过前向和侧向散射光设门分析细胞，排除掉fluo-3 AM阴性的死细胞。

lgfffancy

niwanmao 发表于 2017-10-7 19:11
英语这么好还说看不懂。好吧，大致步骤如下：

真的很谢谢老师，so touched,
还想补充一个问题，检测钙流的话可以通过流式图得到细胞内ca的实际浓度或者相对浓度吗？想要做统计分析的话，在流式图中需要得到哪些数据啊，各时期的mean值？

niwanmao

lgfffancy 发表于 2017-10-8 02:02
真的很谢谢老师，so touched,
还想补充一个问题，检测钙流的话可以通过流式图得到细胞内ca的实际浓度或者 ...

需要事先用已知浓度的钙离子溶液做标准曲线，然后用测得的平均荧光强度进行曲线拟合计算。