关于OIMP23的重复性实验

skywalker

大家好，我最近针对OIMP23这个实验，进行了一次类似重复性的实验。
其中实验的样本来源是新鲜采集的外周血。
FACS Panel design 因为本身实验室抗体库存的限制，所以没有完全复制文章中的panel。
遇到的问题我在这里罗列如下
1. the ratio of CD4+/CD8+的比例在1左右，我认为可能不在正常的值范围内。
2.NKT的比例略高。
3.Monocytes中的CD14+CD16+那群intermediate monocyte的比例，感觉比较高。
4.basophill的分离，在CD25+CD38+之后，分离出来的细胞，有明显的两群，其中有一群高表达CD16,被我分离出来之后，才得到如图中所示的basophils。暂时不知道为什么会这样。
5。本身的panel design不太合理。CD25和CD127分别是APC 和AF700,补偿值较大，也会在调整补偿的时候，造成其他细胞团的扭曲。
6.关于neuthrophils，在最终分离出来之后，用CD127 vs CD69, 我并没有看到CD127 有任何的表达。这点和文献不符合。
因为本人本身不是临床出身，对于人正常外周血的流式分析还是非常的菜鸟。所以希望有相关的人士进行解答。
ppt 前面部分是我对oimp这个文章的分解，最后从第12页开始是我自己做的数据。

非常期待大家给我的解答。谢谢！

niwanmao

做得非常漂亮，很细。

1、CD4：CD8为什么认为可能不在正常范围呢？
2、NKT这个比例也是可接受的，占淋巴细胞9％以内应该都是可接受的。
3、单核细胞的中间型单核也还好的，不知道你为什么觉得高。
4、嗜碱那个区域因为会有很多干扰，所以你这样的设门是正常的，高表达CD16的是附近的NK细胞干扰。
5、补偿无法完全调整到位，在多色流式中较常见，问题不太大。
6、CD127你看一下你的抗体克隆号与文献中的克隆号是否一致，这个影响很大。

skywalker

niwanmao 发表于 2017-10-31 22:23
做得非常漂亮，很细。

1、CD4：CD8为什么认为可能不在正常范围呢？

你好，感谢你的回复。
因为本人一直以来做的都是临床前的样本分析，对人的样本不是非常的熟悉。但是我一般检测的样本，已经一些资料都显示 CD4+/CD8+ 一般应该在1.5~2 之间。这次的样本CD4+/CD8+在1左右，感觉CD4+ 的比例有点低。
关于CD127我再查一下克隆号。谢谢！

niwanmao

skywalker 发表于 2017-11-1 09:55
你好，感谢你的回复。
因为本人一直以来做的都是临床前的样本分析，对人的样本不是非常的熟悉。但是我一 ...

CD4：CD8的比值你记错了，不信请参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3460-1-1.html

skywalker

niwanmao 发表于 2017-11-1 19:15
CD4：CD8的比值你记错了，不信请参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3460-1-1.html
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谢谢分享。