双染测细胞凋亡结果图求助

牵牵乾乾手

各位老师好，流式小白前来求助。我用Annexin-V-FITC/PI凋亡检测试剂盒，按照试剂盒操作染色之后，用Guava easy cyte 6 HT-2L流式细胞仪（美国默克密理博公司）检测，操作步骤也是按照默克工程师说的步骤，分析也是用的流式随机软件，可是出来的图总是堆在一堆，药物处理组也没有明显的作用，求助老师们指导一下，谢谢！

另：试剂盒是国产的，细胞数＞10^5

niwanmao

1、确定一下FITC和PE在这个机器是否对应这两个通道。
2、这两个通道的坐标请设置为LOG，目前的LIN坐标是不行的。

牵牵乾乾手

niwanmao 发表于 2017-12-12 12:10
1、确定一下FITC和PE在这个机器是否对应这两个通道。
2、这两个通道的坐标请设置为LOG，目前的LIN坐标是不 ...

我咨询过工程师，说是相对应的，我再看看怎么设置成LOG，谢谢倪老师

a3351460

niwanmao 发表于 2017-12-12 12:10
1、确定一下FITC和PE在这个机器是否对应这两个通道。
2、这两个通道的坐标请设置为LOG，目前的LIN坐标是不 ...

老师，请问一下，凋亡流式的时候，需要为什么需要单阳管调电压，而不能直接blank调电压，双阳管测定凋亡？

niwanmao

a3351460 发表于 2017-12-12 14:19
老师，请问一下，凋亡流式的时候，需要为什么需要单阳管调电压，而不能直接blank调电压，双阳管测定凋亡 ...

单阳性管是调节补偿，不是电压。用Blank调节电压，但是Blank的细胞要选择那种加药处理过的，可以体现细胞本底。

初学者一号

我也用的是这台仪器，建议数值这样设置！
PI用的是Red-B通道检测
FITC建议用Green-B通道检测

初学者一号

log再这里找

牵牵乾乾手

初学者一号 发表于 2017-12-17 16:31
我也用的是这台仪器，建议数值这样设置！
PI用的是Red-B通道检测
FITC建议用Green-B通道检测 ...

非常感谢！更正过后的图确实是您发的这样子的，太感谢了！另外想请教您有没有用这台仪器测过PI单染测细胞周期？如果有的话是怎么设置的呢？我的图里的峰分不开，没有办法区分各个时期

力力在目

niwanmao 发表于 2017-12-12 19:11
单阳性管是调节补偿，不是电压。用Blank调节电压，但是Blank的细胞要选择那种加药处理过的，可以体现细胞 ...

老师您好，那要是检测不同浓度药物对细胞凋亡的影响，我的实验组是不同浓度药物，对照组是空白细胞直接染色的。程序时电压用什么细胞调呢？谢谢老师