抗真菌药物的研究，流式细胞术高通量筛选意义重大

niwanmao

侵入性念珠菌病的发病率和死亡率在逐步增高，造成国家和全球巨大的保健费用损失，其促成因素之一是念珠菌对临床上使用的抗真菌剂药物耐药性发展有关，而且目前可用的抗真菌药物数量有限，使用上也存在较大限制。由于新型药物开发中的传统技术非常耗时，因此使用流式细胞仪进行高通量筛选成为一种潜在的工具，可用于鉴定有效的新型抗真菌药物。

Ku Tsun Sheng等人在2017年12月份的Expert Opin Drug Discov杂志上发表了一篇综述《Candidiasis and the impact of flow cytometry on antifungal drugdiscovery》，讨论了如何利用流式细胞术，从大量生物活性化合物的文库中自动化、高通量筛选出潜在的抗真菌药物。他们还回顾了使用这种研究方法确定具有抗真菌活性的化合物的研究。

其实，在药物筛选上，流式检测的指标很简单，就是检测微生物的死亡情况，大多是用PI标记微生物死活，如下图：


图1、上述流式细胞术直方图显示的是对照或用提取物孵育白色念珠菌24小时后，用PI标记真菌死活。 （A）白念珠菌样品PI阴性对照，99.8％存活率; （B）白色念珠菌与乙醇70％PI阳性对照孵育30分钟，活力为0.1％; （C）白色念珠菌与water dry leaf未煮沸提取物1μg/ mL，0.6％生存力; （D）白色念珠菌与甲醇1μg/ mL，0.1％生存率; 和（E）白色念珠菌与water non-dried leaves未煮沸提取物，1.5μg/ ml，存活率0.2％。

尽管指标简单，但一旦结合了HTS（高通量筛选），意义大不一样。Ku Tsun Sheng N认为，使用流式细胞术的高通量筛选，大大减少了筛选数千种化合物所需的处理时间，并且有助于增强我们对真菌发病机理的理解，这项技术是帮助科学家确定新型抗真菌药物的有力工具。看一下下表中2011－2016年期间用流式筛选出的抗真菌药物，我们就明白，流式不只是检测淋巴亚群、免疫分型那么小的用途。



文献源：
Ku Tsun Sheng N,Bernardo Stella,WalravenCarla J et al. Candidiasis and the impact of flow cytometry on antifungal drugdiscovery.[J] .Expert Opin Drug Discov, 2017, 12(11): 1127-1137.

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