做细胞周期的时候，每次都是收不到细胞，其实样品不少。

初学者一号

做细胞周期的时候，每次都是收不到细胞，其实样品不少。
同一个实验我做了好几遍了，每次收集样品的时候，样品的细胞数，一次比一次收集的少，总是以为是细胞处理的问题，但是一次次的改善，都没得到解决！！！！！
这次我特地用同一个样品，收了三次！！结果一次比一次细胞少。最后一次都没收满！！！

samly0

第一次收集细胞离心后有看到细胞沉淀么？离完心把离心管放架子上动作要轻柔，以免细胞沉淀被震散到上清里，弃液时被带走，可以仔细看看从哪一步开始离心后就看不到细胞沉淀了，先排除是不是弃上清时不小心把沉淀也弃掉的可能

niwanmao

上次我们发布的那个活动你没参与，可惜：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6243-1-1.html

如果上机前可看到样本悬液混浊，说明是细胞不少的，应该就是采集上的问题。
现在明确一下：
1、离心速度多少？
2、用多少浓度的乙醇固定？
3、上机前是否用显微镜观察过细胞？

初学者一号

niwanmao 发表于 2017-12-19 08:02
上次我们发布的那个活动你没参与，可惜：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6243-1-1.html

如果上机前可 ...

离心速度是3000r/min
400ul的PBS重悬细胞加到80%的乙醇里固定，-20度固定过夜，上机前是用细胞筛过路过的。

紫俊

3000r太高了吧，细胞都碎了

初学者一号

紫俊 发表于 2018-1-26 14:26
3000r太高了吧，细胞都碎了

我是按照我自己的离心机写的，3000r也就600g左右！