细胞因子测定奇怪的问题

ourfamily_2012

最近做了流式检测脾淋巴CD8阳性细胞IFN-r和TNF-a细胞因子刺激分泌的试验，CD8抗体是APC-Cy7荧光标记，TNF是BV21荧光标记，IFN是 PE-Cy7荧光标记，做了补偿，但是不知为什么，看PMA+IONO的刺激组结果，感觉细胞群还比较正常，而未刺激的空白组，细胞群就感觉像没调好补偿似得。
另外，需要提一下的是，我这次实验由于手头上缺少IgG isotype的材料，所以只做了三个荧光的单标管和没有任何荧光标记的NC管。先谢谢了！

未刺激组

PMA+IONO刺激组

niwanmao

ourfamily_2012 发表于 2017-12-19 20:08
首先谢谢大家的回复。
倪老师，那个APC-CY7和PE-CY7不需要补偿吗？我上CD8-APC-CY7单染管的时候，能看到 ...

大多数不需要，不过我在做10色的时候也碰到过，部分组合会有，但不太多。主要因为两个都是串联染料，存在能量转移到Cy7。

你这里的结果分群很清楚，稍微调整一下补偿好了。

ghqiu09

感觉不好看的话，先圈CD8，然后再分析TNF和IFN

niwanmao

就这三个标记吗？这三个通道应该是没补偿的，为什么调节补偿呢？

ourfamily_2012

首先谢谢大家的回复。
倪老师，那个APC-CY7和PE-CY7不需要补偿吗？我上CD8-APC-CY7单染管的时候，能看到在PE-CY7的很明显的荧光泄漏呢？这是怎么回事呢？

ourfamily_2012

niwanmao 发表于 2017-12-19 17:36
就这三个标记吗？这三个通道应该是没补偿的，为什么调节补偿呢？

首先谢谢大家的回复。
倪老师，那个APC-CY7和PE-CY7不需要补偿吗？我上CD8-APC-CY7单染管的时候，能看到在PE-CY7的很明显的荧光泄漏呢？这是怎么回事呢？

ourfamily_2012

niwanmao 发表于 2017-12-19 15:02
大多数不需要，不过我在做10色的时候也碰到过，部分组合会有，但不太多。主要因为两个都是串联染料，存在 ...

谢谢倪老师的帮助