流式检测CTC

花生小将99

用流式检测CTC，APC染CD45鉴定白细胞，PE染EPCAM鉴定CTC，调好blank后，为什么我单染APC-CD45的时候PE-EPCAM会上移，按道理我只单染了APC，PE应该和blank一样，不应该往上移，求教，谢谢！

niwanmao

这就是理论和实际的区别。
可能与操作步骤中的些许差异有关，也可能与获取当时，仪器的状态变化有关，因为仪器流动室如果被脏东西干扰，容易引起一些信号的变化。

花生小将99

niwanmao 发表于 2017-12-24 20:56
这就是理论和实际的区别。
可能与操作步骤中的些许差异有关，也可能与获取当时，仪器的状态变化有关，因为 ...

那我该如何避免这种情况呢，不然我在画十字门的时候不知道该怎么画，是该根据blank画还是单阳划分呢

niwanmao

花生小将99 发表于 2017-12-25 13:26
那我该如何避免这种情况呢，不然我在画十字门的时候不知道该怎么画，是该根据blank画还是单阳划分呢 ...

根据单阳，但是你首先要排除掉机器状态不稳定的因素，否则状态不稳定，你标本与标本之间的差异也会变大。

花生小将99

另外，我想再请教一下如何对用流式细胞仪进行绝对计数，比如我检测CTC的回收率，最后上流式如何知道我的检测管里面到底有多少个肿瘤细胞，必须把一管细胞都检测完么

niwanmao

花生小将99 发表于 2018-1-2 14:44
另外，我想再请教一下如何对用流式细胞仪进行绝对计数，比如我检测CTC的回收率，最后上流式如何知道我的检 ...

不用，你只需要加入已知数量的计数微球，然后根据体积，就可以算出微球的浓度，接着，根据获取的微球和CTC细胞比例，就可以计算出CTC细胞浓度，再乘以之前得到的样本体积，就算出总数。

花生小将99

再想请教一下，所有的白细胞都表达CD45抗体么，为什么我用红细胞裂解的方法得到的白细胞，经过CD45负向吸附，还是会剩余很多白细胞，尤其是粒细胞。

花生小将99

我可以再增加一个抗体，比如CD15或者CD16和CD45一块联合进行负向吸附么

lilizhou

是否做同型对照管呢？根据同型对照画门可能会准确一些

niwanmao

花生小将99 发表于 2018-1-25 14:04
我可以再增加一个抗体，比如CD15或者CD16和CD45一块联合进行负向吸附么

可以多次富集，但任何分选方式，都不可能实现100%的，这是要有心理准备的。