流式分选循环肿瘤细胞（CTC）

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最近想用流式做外周血CTC分选，关于多色荧光设计，有几个问题想请教一下各位前辈：
1.机器为BD Aria III ，初步设计DAPI ，FITC-CD45，Alexa Fluor® 647 -Cytokeratin，PE-CF594- Epcam，这样搭配有没有问题？
2.后期再添加PE-Cy™7-CD44和PerCP-Cy™5.5 - CD24，这两个荧光素可以不可以？

liuruiluna

不知有没有文献支持这样分选，看你要放的marker应该是要分乳腺癌CTC吧？一般CTC含量很低，样本量多吗？分选之后下游实验做什么？ 如果血量很大建议先用CD45去除的磁珠预富集一下。如果分选后还要活的细胞，不知道Cytokeratin是否需要破膜啊，一般这种角蛋白好像表达在胞浆内，如果要活的细胞是不是应该只分标记表面标志来分选？

niwanmao

Cytokeratin是胞内的，不太适合分选后培养，不过分选后测序啥的，倒是可以试识。
荧光素搭配上，PE-CF594对应的是Beckman的ECD，你确定能在AriaIII上面使用吗？滤光片配置上能否确认一下？

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niwanmao 发表于 2018-1-10 12:26
Cytokeratin是胞内的，不太适合分选后培养，不过分选后测序啥的，倒是可以试识。
荧光素搭配上，PE-CF594对 ...

机器上有PE-Texas Red这个通道，PE-CF594可以用这个通道吧？滤光片616/23

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liuruiluna 发表于 2018-1-10 10:07
不知有没有文献支持这样分选，看你要放的marker应该是要分乳腺癌CTC吧？一般CTC含量很低，样本量多吗？分选 ...

对的，目前打算分选乳腺癌CTC，样本打算选择晚期患者，下游实验打算做CTC亚型分析，至于CK可以得固定细胞后标记，分选后不进行细胞培养