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悬赏1流星未解决
1. 低温裂解 用4-8˚c的lysis buffer （借鉴Sigma配方1.65g NH4Cl, 0.24g NaHCO3, 40ul 0.5M EDTA, addwater to 200ml）裂解红细胞。在冰浴上裂时，细胞裂解15min后经HBSS洗涤两次后仍有部分明显的红细胞残留。
结果：细胞含量约4x10^5, 活细胞比例80%。（雪貂每次仅能采0.2-0.4ml血）
2常温裂解
用上述lysis buffer ，将buffer恢复到室温，再裂解红细胞。
在室温裂解红细胞时，细胞裂解15min后经HBSS洗涤两次后仍有部红细胞残留。
若室温裂解红细胞时，细胞裂解25min后经HBSS洗涤两次无红细胞残留，但活细胞比例显著下降。降至50%以下。
问题： 1）少量残留红细胞是否影响后续检测（检测目标为一般的细胞分型，CD4,8,B，DC, Granulocyte）。
2）活细胞数太少是否显著影响最终操作步骤完成后的活细胞数。后续操作步骤有： Fc封闭，表面marker染色，固定／渗透后内部marker染色。
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发表于 2018-1-13 12:33:45
发表于 2018-1-13 13:18:34
