流式，细胞分群不明显，也没有做同

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@niwanmao 老师，您好，最近我做流式遇到了一些问题，想向您请教一下：上面几幅图是我做流式的结果，用的FlowJo分析，发现总是会提示：有一些events are on the chart edge，这个样本是单染管，染的DAB2，间标FITC，可以帮我分析一下原因吗？

另外还有一些我之前的流式结果：

因为这个课题主要是想找几个maker从一群细胞（细胞系，经药处理）分选出目的细胞，细胞占比较小，现在我们找的几个maker染出来都没有明显的分群，因为没有做同型对照，也不好画门，希望老师能给点建议，非常感谢了！

niwanmao

FSC和SSC散点图如何？
染色的方案是什么样的？
这两个信息能否提供一下

tiger

第一问题，未看到未染色样品的情况，单就这个样品，貌似FITIC电压太低，也有可能是过补偿。第二个问题，未染色样品是什么情况？

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niwanmao 发表于 2018-2-28 14:37
FSC和SSC散点图如何？
染色的方案是什么样的？
这两个信息能否提供一下

非常感谢老师的回复，我这个实验是这样设计的：

这次只做了两个单染，maker分别是DAB2和CD49c，CD49c为PE直标，DAB2抗体没有带荧光，分别试了一下FITC和Alexa Fluor594标记的两个二抗。
blank组：

S2-FITC-DAB2组的散点图： 和




另外，我想请教一下老师，这个实验直标抗体PE-CD49c染出来的三个抗体梯度荧光都比较强，没有明显的分群：

同时，间标Alexa Fluor594或FITC-DAB2荧光都很弱，这个可能是实验真实情况还是实验过程中哪一步没做好呢？

MonMMonster

tiger 发表于 2018-2-28 14:58
第一问题，未看到未染色样品的情况，单就这个样品，貌似FITIC电压太低，也有可能是过补偿。第二个问题，未 ...

老师您好，谢谢您的回复，第二个问题未染色组结果如下：第一列为blank组，二、三列分别为单染 组