关于fc阻断和同型对照的问题

潘潘杰

做了Fc Block将Fc受体封闭了，那荧光抗体还会非特异性结合吗？所以是不是可以直接拿blocking后的unstained管做阴性对照了，就没必要做isotope了，这就是重复啊。。。这两者是重复吗？

潘潘杰

damaiyawo 发表于 2018-4-16 15:15
非特异结合的情况并非只单单来源于FC受体，所以要是分群不好，最好用ISOTYPE ...

那我fc 阻断后再做个FMO，是不是就不用isotope了呢？

niwanmao

Fc Blocking阻断的是Fc受体，避免Fc受体引起的非特异性结合，但是在多色流式中，还有荧光渗漏、细胞处理时的药物等影响，前者需要再加做一个FMO对照，后者需要你进行Fc Blocking时采用同样处理的样本。

PS：为了网站的规范，发帖请在http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?gid=37处选择相应的子版提问，谢谢。

潘潘杰

niwanmao 发表于 2018-4-1 22:00
Fc Blocking阻断的是Fc受体，避免Fc受体引起的非特异性结合，但是在多色流式中，还有荧光渗漏、细胞处理时 ...

好的，老师，下次一定按板块发帖，第一个问题：所以老师FC受体阻断后，就不需要再做isotope了吧（假设我另外再做FMO）？第二个问题就是：因为FMO和isotope不是一回事吧？一个是看非特异性结合一个是排出荧光之间的影响。

damaiyawo

FMO中缺失的荧光通道，最好用ISOTYPE来代替。比如要检测treg，做FoxP3的FMO时最好标志CD4，CD25和FoxP3的ISOTYPE。

潘潘杰

damaiyawo 发表于 2018-4-16 14:40
FMO中缺失的荧光通道，最好用ISOTYPE来代替。比如要检测treg，做FoxP3的FMO时最好标志CD4，CD25和FoxP3的IS ...

谢谢亲的回答，可是我不做包内foxp3的话，一般就表面marker，FC受体阻断剂已经阻断了，是不是就不用再做isotype了

damaiyawo

表面标志分团很好的话，FMO和iso都可以不用的，有经验条补偿的话连单阳管都不用的

潘潘杰

damaiyawo 发表于 2018-4-16 14:54
表面标志分团很好的话，FMO和iso都可以不用的，有经验条补偿的话连单阳管都不用的 ...

亲，现在讨论的是分布不好的情况。。。。。。。。

damaiyawo

非特异结合的情况并非只单单来源于FC受体，所以要是分群不好，最好用ISOTYPE

niwanmao

潘潘杰 发表于 2018-4-16 15:18
那我fc 阻断后再做个FMO，是不是就不用isotope了呢？

是的。