ROS实验流式圈门问题

Snailsix

各位老师大神，本人实验操作流式细胞仪测ROS时遇到的圈门，求助！！！！


问题：
1、为什么画P1门的位置不同时，所得的Median值会差那么多？？？？那么画门时我该画在什么位置是最合适的？？
2、为什么实验时有时会出现两个如图大小不同的峰？这一般是什么原因导致的呢？我改以哪个为准？

新手，流星也不多，先谢谢各位的关注和解答
谢谢谢谢

niwanmao

1、FSC这么小，是因为细胞小还是电压过低没调出来？
2、你圈一下FITC阳性的细胞，然后反过去看它们在FSC/SSC上的位置。确定细胞群位置，然后再圈。
3、你第二图之所以MFI下降，是因为圈入了太多的阴性细胞，所以确定正确的细胞群位置很重要。

Snailsix

niwanmao 发表于 2018-4-11 08:16
1、FSC这么小，是因为细胞小还是电压过低没调出来？
2、你圈一下FITC阳性的细胞，然后反过去看它们在FSC/SS ...

不好意思，老师
最近在做实验没看网站

是电压调小了，A549细胞挺大的

对于第二点，我用的是过氧化氢溶液来做阳性对照，可是阳性还没处理组的高，过氧化氢浓度高了，细胞很快就死，摸不出一个很好的处理浓度和时间，没有重复性出现，一天一个样。

老师有什么建议吗？
谢谢老师的关注和回复

谢谢

livan724

Snailsix 发表于 2018-4-19 20:18
不好意思，老师
最近在做实验没看网站

得把FSC的电压调大点收数据，还要看看正常对照管的细胞群位置来确定圈门