胞内蛋白的间标怎么做

WXR0808

我要检测的7个蛋白因子都是胞内蛋白，因为样本量很少，不能做WB，但是做流式目前遇到的问题是只能做间标，我的一抗有5个是兔抗人，2个鼠抗人，二抗都是羊抗鼠、羊抗兔的荧光蛋白，一抗的同型对照我都找到了，但是师姐说我的二抗也是需要同型对照的，但是我不知道该怎么选二抗的同型对照，而且因为我做的都是多蛋白的间标，对照组我也不知道该怎么设置，求大神指点

774055480

是胞内游离的蛋白因子的话可以考虑用CBA的方式检测的，都是间接标记不是很好，有条件还是买直标的抗体比较简单点

WXR0808

774055480 发表于 2018-4-18 11:21
是胞内游离的蛋白因子的话可以考虑用CBA的方式检测的，都是间接标记不是很好，有条件还是买直标的抗体比较 ...

我买不到直标的抗体，我要做的这几个蛋白属于信号通路蛋白，而且很少有人做，查的文献都是做的动物实验的WB，而我直接用的人的PBMC，细胞量不多。

niwanmao

你这么多抗体的话，建议想办法找直标的。实在找不到直标的，自己买个荧光素标记试剂盒，将抗体标上荧光。